БЫСТРАЯ И ЭФФЕКТИВНАЯ ЭКСТРАКЦИЯ РАСТВОРИМЫХ БЕЛКОВ ИЗ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ БЕЗ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ СТЕНОК

© 2006 г. В. Н. Данилевич^#, Л. Е. Петровская, Е. В. Гришин

^#Tел.: (495) 336-65-40; факс: (495) 330-73-01; e-mail: [email protected]

Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 17.02.2006 г. Принята к печати 31.03.2006 г.

Исследована способность буферных растворов, содержащих в низких концентрациях неионные детергенты (Triton X-100, Tween 20, Bridj 58, Lubrol PX) и анионный детергент дезоксихолат натрия, а также смеси этих детергентов с хаотропами (мочевина, гуанидиния хлорид), экстрагировать внутриклеточные белки грамотрицательных микроорганизмов (E. coli, Pseudomonas aeruginosa). Установлено, что наиболее эффективными являются растворы, содержащие Triton Х-100 и дезоксихолат натрия, а также смеси этих детергентов с мочевиной. Показано, что экстракция белков из клеток бактерий в изученных условиях не связана с выходом ДНК в раствор, но сопряжена с экстракцией низкомолекулярной РНК. При этом уровень экстракции белков достигает 80%. В процессе экстракции не происходит разрушение клеточной стенки бактерий, а, по всей видимости, имеет место просачивание (ультрафильтрация) белков через ячейки муреиновой сети. Предлагаемые нами буферные смеси близки по эффективности или превышают таковую коммерческого реагента CelLytic B (Sigma, США). Обсуждаются области практического применения разработанных хаотропных смесей.

Ключевые слова: грамотрицательные микроорганизмы; E. coli; детергенты, неионные и анионные; мягкие хаотропные растворы; экстракция белков и РНК; электрофорез SDS-ПААГ.

Биоорг. химия 2006, 32 (6):579-588