ЭКСПРЕСС-ГИБРИДИЗАЦИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХ КОЛОНИЙ С ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМИ ЗОНДАМИ

© 2007 г. Е. В. Четверина^#, А. В. Кравченко, М. В. Фалалеева, А. Б. Четверин

^#Тел.: (4967) 73-89-17; факс: (495) 632-78-71; e-mail: [email protected]

Институт белка РАН, 142290, Пущино Московской обл.

Поступила в редакцию 30.06.2006 г. Принята к печати 03.10.2006 г.

Показано, что колонии ДНК, образованные при осуществлении ПЦР в полиакриламидном геле, а также колонии РНК, выросшие в агарозном геле, содержащем Qβ-репликазу, можно обнаружить с помощью процедуры, включающей перенос молекулярных колоний на нейлоновую мембрану и гибридизацию мембраны с флуоресцентно меченными олигонуклеотидными зондами. Предложенные усовершенствования делают процедуру гибридизации существенно проще и быстрее. На примере химерной последовательности AML1-ETO, являющейся маркером часто встречающегося лейкоза, показано, что метод экспресс-гибридизации молекулярных колоний позволяет быстро обнаруживать одиночные молекулы и определять титр ДНК- и РНК-мишеней. Гибридизация со смесью двух олигонуклеотидных зондов, меченных разными флуорофорами и комплементарных составным частям химерной молекулы, позволяет обнаруживать молекулярные колонии, содержащие обе части химерной последовательности, повышая таким образом специфичность диагностики.

Ключевые слова: молекулярная диагностика, метод молекулярных колоний, гибридизация на мембране, флуоресцентные зонды, лейкоз, химерные РНК-маркеры.

Биоорг. химия 2007, 33(4): 456-463