ИНГИБИТОР СЕРИНОВЫХ ПРОТЕИНАЗ ИЗ АКТИНИИ Radianthus macrodactylus: ВЫДЕЛЕНИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

© 2007 г. И. Н. Сокотун, Е. В. Лейченко^#, Т. И. Вакорина, А. А. Еськов, А. П. Ильина, М. М. Монастырная, Э. П. Козловская

^#Факс: (4232) 314-050; e-mail: [email protected]

Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, 690022, Владивосток, просп. 100 лет Владивостоку, 159

Поступила в редакцию 18.08.2006 г. Принята к печати 01.11.2006 г.

Из тропической актинии Radianthus macrodactylus комбинацией методов жидкостной хроматографии был выделен ингибитор сериновых протеиназ, обозначенный InhVJ, с молекулярной массой 6106±2 Да. Молекула InhVJ состоит из 57 а.о., имеет три дисульфидные связи и не содержит остатков метионина и триптофана. Установлена N-концевая аминокислотная последовательность ингибитора (19 а.о.). Показано, что этот фрагмент имеет высокую степень гомологии с N-концевыми аминокислотными последовательностями ингибиторов сериновых протеиназ из других видов актиний, а также пресмыкающихся и млекопитающих. Изучена пространственная организация ингибитора на уровне третичной и вторичной структуры методами УФ- и КД-спектроскопии. Определены удельные и молярные коэффициенты поглощения InhVJ. Рассчитано процентное содержание канонических элементов вторичной структуры полипептида. Ингибитор имеет высокоорганизованную третичную структуру и относится к смешанным α/β- или α+β-полипептидам. Установлено, что InhVJ высокоспецифичен по отношению к трипсину (К_i 2.49x10^-9 М) и α-химотрипсину (К_i 2.17x10^-8 М) и не ингибирует такие протеиназы, как тромбин, калликреин и папаин. На основании физико-химических свойств ингибитор InhVJ был отнесен к семейству ингибитора Кунитца.

Ключевые слова: актиния, ингибитор протеиназ, сериновые протеиназы, константа ингибирования, аминокислотная последовательность, УФ-спектроскопия, круговой дихроизм.

Биоорг. химия 2007, 33(4): 448-455