ГЕННО-ИНЖЕНЕРНЫЙ ИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА. X. УПРОЩЕНИЕ РЕНАТУРАЦИИ ПРЕДШЕСТВЕННИКА ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА

^#Тел.: (495) 330-72-74; e-mail: [email protected]

Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 01.02.2007 г. Принята к печати 09.04.2007 г.

Проведена ренатурация биотехнологического предшественника инсулина человека из раствора телец включения без предварительного сульфирования или восстановления остатков цистеина. Тельца включения растворили в 8 М мочевине с добавлением 10 мМ 2-меркаптоэтанола. Из раствора удалили гидрофобные клеточные компоненты пропусканием через нейтральный слабогидрофобный сорбент, раствор разбавили в 5 раз и ренатурировали с добавлением 0.3 мМ цистина для инициации реакции тиол-дисульфидного обмена. Присутствие нуклеиновых кислот и примесных клеточных белков не оказывает влияния на ренатурацию. Полученный ренатурированный предшественник инсулина человека очищен металлхелатной аффинной хроматографией и превращен в инсулин двухступенчатым ферментативным расщеплением.

Ключевые слова: инсулин человека рекомбинантный; гибридный белок – биотехнологический предшественник, тельца включения, ренатурация.

Биоорг. химия 2008, 34(1): 63-66