ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ГЛУТАМИЛЭНДОПЕПТИДАЗЫ Bacillus intermedius, СЕКРЕТИРУЕМОЙ РЕКОМБИНАНТНЫМ ШТАММОМ Bacillus subtilis НА РАЗНЫХ ФАЗАХ РОСТА

© 2008 г. Т. Р. Шамсутдинов*^#, Н. П. Балабан*, А. М. Марданова*, Ю. В. Данилова*, Г. Н. Руденская**, М. Р. Шарипова*

^#Тел.: (843) 2315256; факс: (843) 2387121; e-mail: [email protected]

*Кафедра микробиологии биолого-почвенного факультета Казанского государственного университета, 420008, Казань, ул. Кремлевская, 18;
**Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва

Поступила в редакцию 30.07.2007 г. Принята к печати 15.10.2007 г.

Рекомбинантный штамм Bacillus subtilis, несущий ген глутамилэндопептидазы B. intermedius на мультикопийной плазмиде Δ58.21, секретирует фермент в среду в фазе замедления и стационарной фазе роста с максимумами накопления на 24-й и 48-й ч. Из культуральной жидкости через 24 и 48 ч культивирования были выделены образцы фермента и очищены до гомогенного состояния ионообменной хроматографией на СМ-целлюлозе и высокоэффективной жидкостной хроматографией на колонке MonoS. Молекулярная масса соответствующих белков составила 29 кДа. Оба препарата были идентичны по структуре, но отличались сродством к специфическому субстрату Z-Glu-pNA. Изучено влияние ионов Ca²⁺, а также специфических низкомолекулярных и белковых ингибиторов на активность фермента, соответствующего разным фазам роста.

Ключевые слова: глутамилэндопептидаза; Bacillus intermedius, рекомбинантный штамм.

Биоорг.химия 2008, 34(3): 322-326