МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ ТИПА КУНИТЦА ГРУППЫ С ИЗ КАРТОФЕЛЯ

© 2008 г. Т. А. Валуева^#, А. С. Сперанская, Т. А. Ревина, А. Б. Шевелев

^#Факс: (495) 954-27-32; e-mail: [email protected]

Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, 119071, Москва, Ленинский просп., 33

Поступила в редакцию 20.07.2007 г. Принята к печати 23.07.2007 г.

В результате клонирования продуктов полимеразной цепной реакции из геномной ДНК картофеля (Solanum tuberosum L., сорт Истринский) выделены 35 клонов, которые представляют собой копии восьми генов, кодирующих ингибиторы протеиназ типа Кунитца, относящихся к группе С. Установлены нуклеотидные последовательности этих генов. Все гены обнаружены впервые и обозначены PKPI-C1–PKPI-С8. Ген PKPI-C2, кодирующий, как было предположено нами ранее, ингибитор субтилизина PKSI, клонирован в вектор pQE30 и затем экспрессирован в клетки Escherichia coli. Рекомбинантный белок PKPI-C2, который самопроизвольно подвергался фолдингу и переходил в растворимое состояние, был очищен до гомогенности методом аффинной хроматографии. Белок PKPI-C2 эффективно подавлял активность субтилизина Карлсберг, но не действовал на трипсин, химотрипсин и папаин.

Ключевые слова: ингибиторы протеиназ типа Кунитца; протеиназы, гены.

Биоорг.химия 2008, 34(3): 344-352