ВЫСОКОЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ И БЫСТРЫЙ МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК-ФРАГМЕНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФОТОПРОТЕИНА ОБЕЛИНА КАК РЕПОРТЕРА

© 2008 г. В. В. Борисова*, И. А. Пышная**, Д. В. Пышный**, Л. А. Франк*^#

^#Тел.: (3912) 49-44-30; факс: (3912) 43-34-00; e-mail: [email protected]

*Институт биофизики СО РАН, 660036, Красноярск, Академгородок, стр. 50;
**Институт химической биологии и экспериментальной медицины СО РАН, Новосибирск

Поступила в редакцию 11.01.2008 г. Принята к печати 05.02.2008 г.

Рекомбинантный Са²⁺-активируемый фотопротеин обелин использовали в качестве репортерного белка при проведении биолюминесцентного твердофазного анализа ДНК методом молекулярной гибридизации. Олигонуклеотидные зонды иммобилизовали на поверхности мелкодисперсного полимера или микробиологических планшет различных видов. В качестве выявляемой ДНК-матрицы использовали 30-звенный олигонуклеотид или его производное с остатком биотина на 3’-конце, а также денатурированный двухцепочечный ПЦР-фрагмент вируса гепатита С (ВГС), в состав которого входила последовательность 30-звенного олигонуклеотида. Мечение зонда в составе гибридизационного комплекса проводили ферментативным удлинением цепи с помощью Taq-ДНК-полимеразы в присутствии биотинилированного дезоксиуридинтрифосфата. Результаты биолюминесцентного анализа сравнивали с результатами колориметрического анализа, полученными при использовании в качестве репортера щелочной фосфатазы. Показано, что использование биолюминесцентной обелиновой метки позволяет существенно ускорить процедуру выявления ДНК, обеспечивая при этом высокую чувствительность анализа (не ниже 10^-15 моль ДНК-матрицы), и дает возможность количественной оценки содержания ДНК-матрицы в анализируемом образце.

Ключевые слова: обелин; биолюминесцентный гибридизационный анализ; ПЦР.

Биоорг.химия 2008, 34 (6): 792-798