МИКРОЧАСТИЦЫ ИЗ КОНДЕНСИРОВАННОЙ ДНК, ОБРАЗУЮЩИЕСЯ В ПРОЦЕССЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

^#Тел.: (495) 336-65-40; факс: (495) 330-73-01; e-mail: [email protected]

*Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Институт микробиологии им. С.Н. Виноградского РАН, Москва

Поступила в редакцию 13.06.2007 г. Принята к печати 02.09.2008 г.

Описан феномен образования микрочастиц ДНК в ходе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Показано, что в ходе ПЦР с генспецифическими, а также с неполностью комплементарными праймерами и c геномной ДНК из дрожжей в качестве матрицы наряду с обычной линейной ДНК образуются сферические микрочастицы, состоящие из чистой ДНК, а также их агрегаты и конгломераты. Микрочастицы образуются на поздних этапах ПЦР и могут быть легко выявлены, если реакцию проводить с флуоресцентно-мечеными олигонуклеотидными праймерами, либо при окрашивании ПЦР-ной смеси флуоресцентными красителями (акридиновым оранжевым, пропидиумйодидом или DAPI). Согласно данным эпифлуоресцентной и электронной микроскопии, размер микрочастиц варьирует от 500 нм до 3–4 мкм, а сами частицы представляют собой многомерные звездчатые сферы или агрегаты из нескольких сросшихся микросфер. Изучены некоторые свойства микрочастиц. Установлено, что катионы Mg²⁺, входящие в состав буфера для ПЦР, играют ключевую роль в формировании микрочастиц и в стабилизации их структуры.

Ключевые слова: полимеразная цепная реакция, KlenTaq-полимераза; линейная двухцепочечная ДНК; микрочастицы ДНК; флуоресцентно-меченые праймеры; флуоресцентные красители; эпифлуоресцентная микроскопия; электронная микроскопия.

Биоорг.химия 2009, 35 (2): 226-238