ПРЯМОЕ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЕ РАСЩЕПЛЕНИЕ ДВУЦЕПОЧЕЧНОЙ ДНК КОНЪЮГАТАМИ БЛЕОМИЦИНА А5 С ТРИПЛЕКСФОРМИРУЮЩИМ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОМ

© 2009 г. А. С. Павлова*^,**, П. Е. Воробьев*^,**, В. Ф. Зарытова*^#

^#Тел.: (383) 3356224; факс: (383) 3333677; e-mail: [email protected]

*Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, 630090, Новосибирск, просп. Лаврентьева, 8;
**Новосибирский государственный университет, Новосибирск

Поступила в редакцию 29.02.2008 г. Принята к печати 06.11.2008 г.

Синтезированы монофункциональные конъюгаты 15-звенного триплексформирующего олигонуклеотида (ТФО) с ковалентно присоединенным остатком блеомицина А5 на 5'-конце (Blm-p15). Впервые получены бифункциональные конъюгаты ТФО, содержащие, помимо остатка антибиотика Blm, остаток интеркалятора 6-хлор-2-метокси-9-аминоакридина (Acr), введенного по 3'-фосфатной группе ТФО через линкер L1 (Blm-p15pL1-Acr) или остаток (N-(2-гидроксиэтил)феназиния (Phn), введенного по 3'-фосфатной группе ТФО через линкер L2 (Blm-p15pL2-Phn). С помощью метода задержки в геле рассчитаны значения констант диссоциации соответствующих триплексов и показано, что введение остатка Acr в состав конъюгата ТФО с блеомицином на порядок повышает стабильность формируемого триплекса. Показано, что все синтезированные конъюгаты способны осуществлять специфическое и неспецифическое расщепление ДНК-мишени с образованием прямых разрывов и щелочелабильных сайтов. Степень специфического расщепления ДНК-мишени составляет 15% в случае 5-кратного избытка конъюгатов по отношению к дуплексу ДНК. Впервые показано, что сайт-направленное расщепление ДНК-мишени в составе триплекса протекает в основном (>90%) с образованием прямых разрывов обеих цепей ДНК. Полученные данные свидетельствуют о перспективности использования блеомицинсодержащих олигонуклеотидов в качестве антигеннаправленных соединений.

Ключевые слова: олигонуклеотиды, триплексформирующие; блеомицин; акридин; феназиний; ДНК, прямые разрывы.

Биоорг.химия 2009, 35 (2): 215-225