НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ОПРЕДЕЛЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ И ПЕРОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

© 2009 г. И. В. Горудко*^#, О. С. Черкалина**, А. В. Соколов**, М. О. Пулина**, Е. Т. Захарова**, В. Б. Васильев**, С. Н. Черенкевич*, О. М. Панасенко***

^#Тел.: (375-17) 209-5437; факс: (375-17) 209-5445; e-mail: [email protected]

*Белорусский государственный университет, кафедра биофизики, 220030, Минск, просп. Независимости, 4;
**ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург;
***ФГУ НИИ физико-химической медицины Росздрава, Москва

Поступила в редакцию 02.03.2009 г. Принята к печати 20.03.2009 г.

В работе впервые описан спектрофотометрический метод определения пероксидазной активности миелопероксидазы (МПО) в плазме крови человека с использованием о-дианизидина (DA) в качестве субстрата и специфических ингибиторов МПО (салицилгидроксамовой кислоты или гидразида 4-аминобензойной кислоты), позволяющих исключить возможный вклад других гемсодержащих пероксидаз (главным образом, гемоглобина и его производных). Определены оптимальные условия (рН, концентрация Н₂О₂), при которых основной вклад в реакцию окисления DA плазмой вносит МПО. Концентрацию МПО определяли с помощью оригинальной методики иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием антител, полученных иммунизацией крыс и кроликов. Разработанная методика ИФА характеризуется высокой чувствительностью (0.2–250 нг/мл). Между активностью МПО, определенной спектрофотометрическим методом, и уровнем МПО, измеренным с помощью ИФА, в плазме крови 38 здоровых доноров выявлена достоверная положительная корреляционная зависимость (Р<0.0001). Предложенные новые подходы к определению МПО в плазме могут быть использованы для оценки концентрации и активности фермента, а также эффективности механизмов, регулирующих функцию МПО в физиологических условиях и при различных воспалительных заболеваниях.

Ключевые слова: миелопероксидаза, пероксидазная активность плазмы, плазма крови, о-дианизидин, гемоглобин, иммуноферментный анализ.