ПРОСТРАНСТВЕННАЯ РЕКОНСТРУКЦИЯ КАПСИДА И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ БЕЛКОВ БАКТЕРИОФАГА SN Pseudomonas aeruginosa ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

© 2009 г. М. В. Фильчиков*, Д. И. Осмаков*, Л. В. Логовская*, Н. Н. Сыкилинда*, В. А. Кадыков*, Л. П. Курочкина*, В. В. Месянжинов*, Р. А. Бернал**, К. А. Мирошников*^#

^#Тел./факс: (495) 335-60-22; e-mail: [email protected]

*Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Университет Техас-Эль Пасо, Эль Пасо, США

Поступила в редакцию 15.05.2009 г. Принята к печати 02.06.2009 г.

Вирулентный бактериофаг SN Pseudomonas aeruginosa относится к виду РВ1-подобных фагов семейства Myoviridae. Сравнительно небольшой (66391 п. о.) ДНК-геном этого фага содержит 89 предсказанных открытых рамок считывания, а протеом включает не менее 20 структурных белков. Представлена пространственная модель капсида, построенная на основе реконструкции криоэлектронно-микроскопических изображений с разрешением около 18 Å, которая выявила ряд особенностей строения капсомеров, присущих только этому виду бактериофагов. Получены и очищены рекомбинантные структурные белки gp22 и gp29 бактериофага SN и специфические поликлональные антитела против них. На препарате очищенного фага SN проведена иммуноэлектронная микроскопия с визуализацией вторичными антителами, конъюгированными с частицами золота. Установлено, что gp29 формирует чехол, а gp22 – декорирующий белок капсида фага SN. Точная идентификация местоположения многокопийных белков представляет интерес как потенциальная основа конструирования генно-инженерных моделей, несущих пептиды на поверхности вирусной частицы (фаговый дисплей).

Ключевые слова: Pseudomonas aeruginosa, бактериофаг SN, структурные белки, пространственная реконструкция; протеомика; криоэлектронная микроскопия; иммуноэлектронная микроскопия.