ФЕРМЕНТАТИВНОЕ ТРАНСГЛИКОЗИЛИРОВАНИЕ ПРИРОДНЫХ И МОДИФИЦИРОВАННЫХ НУКЛЕОЗИДОВ ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ ТЕРМОСТАБИЛЬНЫМИ НУКЛЕОЗИДФОСФОРИЛАЗАМИ ИЗ Geobacillus stearothermophilus

© 2009 г. С. А. Таран*^,**^#, К. Н. Веревкина*, С. А. Феофанов*, А. И. Мирошников*

^#Тел.: 8 (4967) 73-17-80; e-mail: [email protected]

*Филиал Учреждения Российской академии наук Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Пущино, Московская обл.;
**Пущинский государственный университет, 142290, Пущино, Московская обл.

Поступила в редакцию 23.03.2009 г. Принята к печати 02.04.2009 г.

Природные и модифицированные пуриновые нуклеозиды синтезированы с использованием рекомбинантных термостабильных ферментов – пуриннуклеозидфосфорилазы II (КФ 2.4.2.1) и пиримидиннуклеозидфосфорилазы (КФ 2.4.2.2) из Geobacillus stearothermophilus B-2194. Ферменты были продуцированы в рекомбинантных штаммах E. coli и, после прогревания клеточных лизатов и удаления коагулированных термолабильных белков, ковалентно иммобилизованы на аминопропилсилохроме AP-CPG-170. Полученные ферментные препараты термостабильных нуклеозидфосфорилаз сохраняли высокую активность при 20-кратном использовании в реакциях трансгликозилирования нуклеозидов при температурах 70–75°C с выходом целевых продуктов до 96%. Благодаря высокой каталитической активности, температурной стабильности, простоте и многократности использования, полученные иммобилизованные ферментные препараты термостабильных нуклеозидфосфорилаз пригодны для получения фармакологически значимых природных и модифицированных нуклеозидов.

Ключевые слова: пуриннуклеозидфосфорилаза; пиримидиннуклеозидфосфорилаза; трансгликозилирование; иммобилизованные ферменты; нуклеозиды модифицированные.