АНТИТЕЛА К СИНТЕТИЧЕСКИМ ФРАГМЕНТАМ НУКЛЕОФОЗМИНА ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ВЫЯВЛЕНИЯ ЕГО МОНОМЕРНЫХ И ОЛИГОМЕРНЫХ ФОРМ

© 2009 г. В. С. Шалгунов*^#, Н. В. Лобанова*, Т. И. Булычева**, Н. Л. Дейнеко**, Т. Д. Волкова*, М. П. Филатова*, А. В. Камынина*, Я. С. Ким*, Н. М. Владимирова*, Д. О. Короев*, Е. В. Ахидова*, О. М. Вольпина*

^#Тел.: (495) 336-57-77; e-mail: [email protected]

*Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Гематологический научный центр РАМН, Москва

Поступила в редакцию 19.05.2009 г. Принята к печати 15.06.2009 г.

Осуществлен выбор и синтез иммуноактивных фрагментов белка нуклеофозмина, соответствующих N-концевому (19–36) и C-концевому участкам (283–294) изоформы NPM1.1 нуклеофозмина, а также их укороченных фрагментов. Проведена иммунизация кроликов свободными полноразмерными пептидами, а также их белковыми конъюгатами. Осуществлена аффинная очистка антител, индуцированных пептидами (19–36) и (283–294), на бромцианактивированной сефарозе, конъюгированной с синтетическими пептидами. Анализом иммуноблотов лизатов клеток HeLa и Ramos установлено, что антитела, индуцированные пептидом (19–36), выявляют мономерную форму нуклеофозмина, а антитела, индуцированные пептидом (283–294) – преимущественно олигомерную. Методом иммуноцитохимического анализа показано, что антитела, индуцированные пептидом (19–36), окрашивают в клетках HeLa и Ramos нуклеоплазму и перинуклеарную область цитоплазмы, но не окрашивают ядрышки, в то время как антитела, индуцированные пептидом (283–294), окрашивают в тех же клетках только ядрышки. На основании этих результатов можно предположить, что в исследованных клетках мономерная форма нуклеофозмина локализована в нуклеоплазме, а олигомерная – в ядрышках. Таким образом, впервые получены антитела, способные преимущественно выявлять мономерную или олигомерную форму нуклеофозмина и позволяющие проводить анализ мономер-олигомерного состояния и локализации нуклеофозмина в опухолевых клетках.

Ключевые слова: нуклеофозмин; олигомеры; синтетические пептиды; антитела; Т-хелперные эпитопы; иммуногенность.