ПОЛУЧЕНИЕ АНТИТЕЛ ПРОТИВ АФЛАТОКСИНОВ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ И ИХ СВОЙСТВА

© 2010 г. А. А. Калиниченко*^,**^#, В. А. Топорова*, А. А. Панина*, Т. К. Алиев*^,***, Е. А. Крюкова*, О. Б. Шемчукова****, О. Н. Солопова****, Л. П. Позднякова****, П. Г. Свешников****, Д. А. Долгих*^,**, М. П. Кирпичников*^,**

^#Тел.: (495) 330-66-38, e-mail: [email protected]

*Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, Москва;
***Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва;
****Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва

Поступила в редакцию 15.05.2009 г. Принята к печати 16.06.2009 г.

Получена и детально охарактеризована панель из 10 моноклональных антител против афлатоксинов B1, B2 и G2. Методами прямого, непрямого и конкурентного иммуноферментного анализа определены аффинность и кросс-реактивность этих антител. Проведено подробное изучение структуры генов моноклональных антител, клонированы и секвенированы вариабельные и константные участки их генов. Анализ нуклеотидных последовательностей подтвердил результаты изотипирования легких и тяжелых цепей антител, полученных методом ИФА. Получена бицистронная конструкция для экспрессии одного из антител в виде Fab΄-фрагмента в клетках Escherichia coli. Осуществлен биосинтез и проведено выделение рекомбинантного Fab΄-фрагмента из культуральной жидкости. Таким образом, в работе представлены и систематизированы данные, открывающие возможности как для создания систем детекции афлатоксинов с помощью полученных моноклональных антител, так и для получения рекомбинантных антител с измененными параметрами специфичности, с использованием методов белковой инженерии.

Ключевые слова: афлатоксины; моноклональные антитела; рекомбинантные антитела; Fab΄-фрагменты.

Биоорг.химия 2010, 36 (1): 122-132