ВЫЯВЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ, ОТВЕТСТВЕННЫХ ЗА СПОСОБНОСТЬ К ОБРАТИМОЙ ФОТОКОНВЕРСИИ МОНОМЕРНОГО КРАСНОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО БЕЛКА TagRFP

© 2010 г. Л. Чжан, Н. Г. Гурская, Е. Е. Копанцева, Н. Н. Мудрик, Л. Л. Вагнер, К. А. Лукьянов^#, Д. М. Чудаков

^#Тел.: (495) 429-80-20; e-mail: [email protected]

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 02.06.2009 г. Принята к печати 30.09.2009 г.

Проведен направленный мутагенез мономерного красного флуоресцентного белка TagRFP и его вариантов с целью получения обратимо фотоактивируемых белков. Показано, что аминокислотные позиции 69, 148, 165, 179 и 181 (нумерация согласно зеленому флуоресцентному белку GFP) играют определяющую роль в проявлении свойств фотоактивируемости. Получен обратимо фотоактивируемый белок KFP-HC, обладающий флуоресценцией в красной области спектра, с максимумами возбуждения и эмиссии при 585 и 615 нм, соответственно. Показано, что интенсивность флуоресценции KFP-HC падает в 5–10 раз (за счет уменьшения квантового выхода флуоресценции) под воздействием зеленого света (530–560 нм) и затем возвращается к исходному уровню при облучении синим светом (450–490 нм) или после инкубации в темноте (время полувосстановления 30 мин).

Ключевые слова: красный флуоресцентный белок; мутагенез; фотоконверсия; флуоресцентное мечение.

Биоорг.химия 2010, 36 (2): 187-192