НОВАЯ СИСТЕМА ДНК-ДИАГНОСТИКИ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ CYP21 ЧЕЛОВЕКА, АССОЦИИРОВАННЫХ С ВРОЖДЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИЕЙ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ

© 2010 г. А. П. Баранник*^#, А. А. Колтунова²*, Л. А. Озолиня²*, Н. В. Лаврова³*, И. А. Шилов³*, И. И. Гузов⁴*, Л. И. Патрушев*

^#Тел./факс: (495) 429-86-10; e-mail: [email protected]

*Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
²*Российский государственный медицинский университет, Москва;
³*Государственное учреждение “Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи” РАМН, Москва;
⁴*Центр иммунологии и репродукции, Москва

Поступила в редакцию 07.10.2009 г. Принята к печати 08.11.2009 г.

Врожденная гиперплазия коры надпочечников (ВГКН), тяжелое заболевание с аутосомным рецессивным наследованием относится к одному из наиболее распространенных генетических нарушений у человека. В основе ВГКН лежит недостаток или отсутствие биосинтеза ключевых стероидных гормонов кортизола и альдостерона при одновременном избыточном синтезе андрогенов в организме пациентов. Более 90% всех случаев этого заболевания являются следствием дефицита фермента 21-гидроксилазы (P450c21). Тяжесть клинических проявлений ВГКН (от потенциально летальных тяжелых симптомов до симптомов средней и слабой тяжести) зависит от степени повреждения фермента. Основной причиной низкой активности 21-гидроксилазы являются различные мутационные повреждения гена, кодирующего данный фермент. Наличие рядом с функциональным геном CYP21, кодирующим P450c21, высокогомологичной последовательности псевдогена затрудняет ДНК-диагностику ВГКН. Для выявления в гене CYP21 наиболее часто встречающихся точечных мутаций, ассоциированных с ВГКН, нами разработана новая система ДНК-диагностики, основанная на ПЦР в режиме реального времени, в которой использованы новые аллель-специфические праймеры и зонды TaqMan для каждой из восьми наиболее часто встречающихся мутаций. Метод был протестирован сначала на искусственных матрицах, в которые с помощью направленного мутагенеза были введены анализируемые мутации, и затем апробирован на клиническом материале – ДНК 43 пациентов с клиническими и биохимическими проявлениями гиперандрогении. Обнаружены две мутации у двух разных индивидуумов: нонсенс-мутация Q318X и миссенс-мутация V281L.

Ключевые слова: врожденная гиперплазия коры надпочечников; 21-гидроксилаза; CYP21; мутации; ПЦР в режиме реального времени.