КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ФОРМЫ ДНК, ОБРАЗУЮЩИЕСЯ В ПЦР С ПЛАЗМИДНЫМИ МАТРИЦАМИ. ДАННЫЕ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

^#Тел.: (495) 336-40-22; e-mail: [email protected]

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 18.07.2009 г. Принята к печати 19.10.2009 г.

Образцы суспензий микрочастиц, полученных в полимеразной цепной реакции на плазмидных матрицах в присутствии различных праймеров, исследованы c использованием техники электронной микроскопии. Во всех образцах выявлены микросферы двух типов: сферической или эллипсоидной формы (гладкие, без шипов) и эллипсоидной формы с крупными шипами и/или выростами; диаметр микросфер варьирует от 1 до 3 мкм. Помимо микросфер, были выявлены так называемые трехмерные сетчатые структуры разнообразных форм, образованные трехмерными наночастицами особой топологии. В некоторых образцах были обнаружены диски микронного диаметра и нанометровой толщины. Показано, что количество сетчатых структур и дисков резко увеличивается в ходе асимметричной ПЦР. В изученных препаратах, кроме того, были выявлены нанонити (нанофиламенты) из ДНК, точечные электронно-плотные частицы (наноточки), электронно-полупрозрачные наночастицы в форме лоскутков, а также крупные электронно-плотные наночастицы шаровидной формы. Исследованы образцы суспензий микрочастиц после их кратковременного прогрева при 94^оС. Зафиксировано частичное плавление гладких микросфер (без шипов) – они теряют часть ДНК, так что просматриваются детали их строения (ультраструктура). Одновременно после прогрева появляются скопления нанофиламентов. Обсуждаются молекулярные механизмы формирования нано- и микрочастиц.

Ключевые слова: полимеразная цепная реакция (ПЦР), KlenTaq-полимераза, плазмидные ДНК, конденсация ДНК, ДНК-микросферы, ДНК-наночастицы, ДНК-нанофиламенты, электронная микроскопия.

Биоорг.химия 2010, 36 (4): 535-546