СВЕРХПРОДУКЦИЯ БЕЛКА ЯДРЫШКА SURF-6 В ФИБРОБЛАСТАХ МЫШИ NIH/3T3 ПРИВОДИТ К СТАБИЛИЗАЦИИ ВНУТРИГЕННЫХ ТРАНСКРИБИРУЕМЫХ СПЕЙСЕРОВ пре-рРНК

^#Тел.: (495) 779-23-66; факс: (495) 335-71-03; e-mail: [email protected]

*Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Медико-генетический научный центр РАМН, Москва;
***Университет Королевы Мэри, Лондон E1 2AT, Великобритания

Поступила в редакцию 23.03.2010 г. Принята к печати 30.03.2010 г.

Белок ядрышка SURF-6 относится к эволюционно-консервативным и жизненно необходимым белкам эукариот, однако, его функция у млекопитающих до сих пор остается не выясненной. В работе изучено влияние сверхпродукции SURF-6 в фибробластах мыши линии NIH/3T3 на содержание различных последовательностей пре-рРНК. Сверхпродукцию SURF-6 вызывали с помощью Tet-On-системы регуляции экспрессии генов и двух плазмидных конструкций. Плазмида pUHrT62-1 кодировала тетрациклинзависимый фактор активации транскрипции – белок rtTA, плазмида pBI-SURF6 содержала кодирующие последовательности генов белков SURF-6 мыши и EGFP, экспрессия которых находилась под контролем rtTA-зависимого промотора. Увеличение содержания SURF-6 наблюдали через 24 и 48 ч после добавления индуктора доксициклина. Дот-гибридизация суммарной РНК, выделенной из клеток с повышенным содержанием SURF-6, с биотинилированными олигонуклеотидными пробами к разным участкам первичных транскриптов рРНК мыши выявила семикратное увеличение содержания ITS2 и двукратное увеличение содержания 5’ETS по сравнению с их уровнем в клетках, трансфецированных теми же плазмидами, но инкубированных без доксициклина. Содержание фрагментов, соответствующих 18S, 5.8S и 28S рРНК, практически не изменялось. Эти наблюдения впервые показали, что, подобно дрожжевому гомологу Rrp14, белок ядрышек млекопитающих SURF-6 способствует стабилизации (препятствует деградации) внутригенных транскрибируемых спейсеров пре-рРНК. На сегодняшний день белки метазоа, играющие сходную роль в биогенезе рибосом, не описаны.

Ключевые слова: белок ядрышка SURF-6, биогенез рибосом, клетки NIH/3T3.