Письмо Редактору

КОДИРУЮЩАЯ ОБЛАСТЬ ДАЛЬНЕКРАСНОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО БЕЛКА KATUSHKA СОДЕРЖИТ СИЛЬНЫЙ ДОНОРНЫЙ САЙТ СПЛАЙСИНГА

© 2011 г. Н. Г. Гурская, Д. Б. Староверов, А. Ф. Фрадков, К. А. Лукьянов^#

^#Тел.: (499) 742-81-22; e-mail: [email protected]

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступило в редакцию 10.11.2010 г. Принято к печати 22.11.2010 г.

Компьютерный анализ последовательности, кодирующей красный флуоресцентный белок Katushka, выявил сильный донорный сайт сплайсинга в 3-концевой области. Для экспериментальной проверки функциональности этого сайта была создана генно-инженерная конструкция, кодирующая белок Katushka и зеленый флуоресцентный белок TagGFP2, разделенные фрагментом гена тафаззина. Сплайсинг такой пре-мРНК должен приводить к сбою рамки между белками Katushka и TagGFP2 при нормальном сплайсинге последовательности тафаззина либо к появлению слитого белка Katushka-TagGFP2 в случае использования донорного сайта сплайсинга внутри последовательности katushka. Проточная цитофлуориметрия показала, что при экспрессии данной конструкции в клетках млекопитающих яркая флуоресценция наблюдается как в красном, так и в зеленом каналах детекции. Следовательно, сайт сплайсинга внутри гена katushka действительно является функциональным. Уничтожение данного сайта сплайсинга с помощью направленного мутагенеза без изменения аминокислотной последовательности белка Katushka привело к исчезновению зеленого сигнала, что соответствует нормальному сплайсингу последовательности тафаззина. Полученный мутантный вариант кодирующей последовательности белка Katushka может быть использован для анализа сплайсинга пре-мРНК на уровне отдельных клеток с помощью флуоресцентной микроскопии и проточной цитофлуориметрии.

Ключевые слова: красный флуоресцентный белок; мутагенез; фотоконверсия; флуоресцентное мечение.