КОНФОРМАЦИОННАЯ СТАБИЛЬНОСТЬ ИНГИБИТОРА СЕРИНОВЫХ ПРОТЕИНАЗ InhVJ ИЗ АКТИНИИ Heteractis crispa

© 2011 г. Т. И. Вакорина^#, И. Н. Гладких, М. М. Монастырная, Э. П. Козловская

^#Факс: (4232) 31-40-50; e-mail: [email protected]

Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, 690022, Владивосток, просп. 100-летия Владивостока, 159

Поступила в редакцию 03.06.2010 г. Принята к печати 02.07.2010 г.

Методом спектроскопии КД изучено влияние температуры и величины pH среды на пространственную организацию молекулы ингибитора сериновых протеиназ InhVJ из актинии Heteractis crispa (=Radianthus macrodactylus) на уровне третичной и вторичной структуры. Показано, что молекула InhVJ обладает высокой конформационной термо- и pH-стабильностью. Определена точка конформационного термоперехода полипептида (70 С), после которой молекула переходит в денатурированное устойчивое состояние с сохранением 80% ингибирующей активности. Установлено, что значительные частично обратимые изменения в пространственной организации молекулы происходят на уровне третичной структуры в диапазоне значений pH 11.0-13.0, что можно объяснить ионизацией остатков тирозина. При низкой величине pH (2.0) молекула InhVJ конформационно стабильна. Результаты тушения остатков тирозина акриламидом показали, что два остатка доступны для тушителя полностью, в то время как третий доступен частично.

Ключевые слова: ингибитор сериновых протеиназ, третичная и вторичная структуры, спектроскопия КД, собственная белковая флуоресценция.