КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ, ВЫДЕЛЕНИЕ И СВОЙСТВА ТИМИДИНКИНАЗЫ ВИРУСА ГЕРПЕСА ПРОСТОГО, ШТАММ L2

© 2011 г. В. Н. Степаненко*, Р. С. Есипов*, А. И. Мирошников*, В. Л. Андронова**, Г. А. Галегов**, М. В. Ясько***, А. В. Гуськова****, А. Ю. Скоблов*, Ю. С. Скоблов*^#

^#Тел.: (495) 336-26-41; e-mail: [email protected]

*Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского Российской академии медицинских наук, Москва;
***Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук, Москва;
****Государственное учреждение Медико-генетический научный центр Российской академии медицинских наук, Москва

Поступила в редакцию 13.12.2010 г. Принята к печати 11.01.2011 г.

Ген UL23 тимидинкиназы (КФ 2.7.1.145) ацикловирчувствительного штамма L2 вируса герпеса простого тип 1 клонирован и экспрессирован в E. coli. Фермент очищен хроматографически до чистоты не менее 90% по данным электрофореза в ПААГ. Определены константы Михаэлиса для реакции с тимидином и ацикловиром. Фермент фосфорилирует некоторые модифицированные нуклеозиды: 3’-дезокситимидин, 3’-дезокси-2’,3’-дидегидротимидин, 2’,3’-дидезоксицитидин, 9-[(гидроксиэтил)метил]гуанин, E-5-(2-бромвинил)-2’-дезоксиуридин, 9-(1,3-дигидрокси-2-пропоксиметил)гуанин, 2’,3’-дидезоксидегидротимидин, -L-2',3'-дидезокси-3'-тиацитидин, 3'-фтор-3'-дезокситимидин. Проведено сравнение свойств очищенного фермента и свойств тимидинкиназ других штаммов вируса простого герпеса, опубликованных ранее. Показано, что фермент ингибируется Н-фосфонатом ацикловира.

Ключевые слова: тимидинкиназа вируса герпеса простого тип 1, клонирование гена в E. coli, экспрессия, свойства.

Биоорг.химия 2011, 37 (4): 490-495