РЕКОМБИНАНТНЫЙ ФРАГМЕНТ 44–77 ФАКТОРА ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ПИГМЕНТНОГО ЭПИТЕЛИЯ ПРЕПЯТСТВУЕТ РАЗВИТИЮ ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ НЕОВАСКУЛЯРИЗАЦИИ РОГОВИЦЫ

^#Тел.: +7 (495) 336-68-33; факс: +7 (495) 330-74 -10; e-mail: [email protected]

*Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП-7 Москва В-437 ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Учреждение РАН Центральная клиническая больница РАН, Москва;
***Государственное учреждение Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Поступила в редакцию:22.06.2011 г. Принята к печати: 07.07.2011 г.

Фактор дифференцировки пигментного эпителия (pigment epithelium–derived factor, PEDF), секретируемый гликопротеин размером 50 кДа, входит в ряд сильнейших эндогенных ингибиторов ангиогенеза. Фрагмент PEDF-(44–77) обладает антиангиогенными свойствами полноразмерного белка и представляет собой потенциальный препарат для лечения заболеваний органов зрения, сопровождающихся патологической неоваскуляризацией.

В работе предложен эффективный масштабируемый биотехнологический способ получения фрагмента PEDF-(44–77) в составе гибридного белка с интеином SspDnaB. Гибридный белок получали в бактериальных клетках E. coli в виде телец включения, солюбилизировали и подвергали автокаталитическому расщеплению с образованием свободного фрагмента PEDF-(44–77) (выход реакции 77%). Целевой пептид отделяли от интеина с помощью тангенциальной ультрафильтрации. Окончательную очистку PEDF-(44–77) производили с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Выход целевого пептида (чистота 99%) составил 65 мг с 1 л культуры.

Антиангиогенная активность полученного пептида была подтверждена in vitro с использованием культуры эндотелиальных клеток мыши SVEC-4-10. Выявлена способность препарата в концентрации 1 нМ подавлять пролиферацию эндотелиальных клеток на 53%, а также ингибировать образование трубочкоподобных структур эндотелиальными клетками. На экспериментальной модели неоваскуляризации роговицы кролика была показана способность полученного рекомбинантного фрагмента PEDF-(44–77) блокировать начальные этапы ангиогенеза.

Ключевые слова: PEDF; рекомбинантный белок; антиангиогенный пептид; неоваскуляризация.