МУТАНТНЫЕ OMPF-ПОРИНЫ Yersinia pseudotuberculosis С ДЕЛЕЦИЯМИ НАРУЖНЫХ ПЕТЕЛЬ: СОЗДАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ КОНСТРУКЦИЙ, ЭКСПРЕССИЯ, ВЫДЕЛЕНИЕ, РЕФОЛДИНГ

© 2012 г. О. В. Сидорова^#, М. П. Исаева, В. А. Хоменко, О. Ю. Портнягина, Г. Н. Лихацкая, Н. Ю. Ким, О. Д. Новикова, Д. К. Чистюлин, Т. Ф. Соловьева

^#Тел.:+7 (4232) 310719; факс: +7 (4232) 314050; e-mail: [email protected]

Учреждение ДВО РАН Тихоокеанский институт биоорганической химии, Владивосток 690022, проспект 100-летия Владивостока, 159

Поступила в редакцию 20.06. 2011 г. Принята к печати 01.07.2011 г.

С помощью сайт-направленного мутагенеза рекомбинантной плазмиды, несущей ген ompF Yersinia pseudotuberculosis, получены гены мутантных OmpF-поринов с делециями наружных петель L1, L6 и L8. Мутантные белки синтезировали в клетках штамма Rosetta Escherichia coli (Novagen, США) и выделяли из телец включения. В результате рефолдинга, проведённого при помощи диализа и ионообменной хроматографии, получили олигомерные формы мутантных белков. Показано, что мутантные белки отличаются от полноструктурного рекомбинантного порина как вторичной, так и третичной структурой. С помощью техники бислойных липидных мембран установлено, что отсутствие петель L1, L6 и L8 не влияет на уровень наиболее вероятной проводимости каналов OmpF-порина псевдотуберкулезного микроба. Согласно данным иммуноблоттинга и ИФА, отсутствие петель L1, L6 и L8 заметно влияет на антигенную структуру мутантных поринов.

Ключевые слова: Yersinia pseudotuberculosis, OmpF порин, рекомбинантные белки, делеции наружных петель.