РЕКОМБИНАНТНЫЙ ГРАНУЛОЦИТАРНЫЙ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩИЙ ФАКТОР (ФИЛГРАСТИМ): ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КОНЪЮГИРОВАНИЯ С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ

© 2012 г. И. А. Пучков*^#, Н. В. Кононова*, А. И. Бобрускин*, Д. И. Баирамашвили**, В. А. Мартьянов*, А. М. Шустер*

^#Тел/факс:+7 (495) 741-78-20; e-mail: [email protected]

*Российская фармацевтическая компания ЗАО “Мастерклон” 119019, Москва, ул. Ленивка, д.3, стр. 11;
**Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова (ИБХ РАН)

Поступила в редакцию: 31.01.2012 Принята к печати: 26.04.2012

В целях создания активной фармацевтической субстанции препарата с пролонгированным действием проведена модификация рекомбинантного человеческого гранулоцитарного колониестимулирующего фактора GCSF (филграстима) полиэтиленгликолем (PEG, М 21.5 кДа). Описан метод получения PEG-производного филграстима, предназначенный для разработки и масштабирования технологического процесса производства. Модификацию белка с помощью PEG осуществляли посредством селективного ковалентного присоединения молекулы α-метил-PEG-пропиональдегида к α-аминогруппе N-концевого аминокислотного остатка метионина рекомбинантного GCSF. Подобраны условия реакции, которые обеспечивают выход целевого продукта не менее 85% от общего белка, высокую концентрацию белка в реакционной смеси (более 9 мг/мл) и позволяют снизить расход PEG в пересчете на концевую α-аминогруппу белка. Данные ОФ ВЭЖХ и MALDI-масс-спектрометрии свидетельствуют о том, что полученный препарат модифицирован PEG по N-концевому остатку и содержит не более 10% продуктов с более высокой степенью модификации.

Ключевые слова: полиэтиленгликоль (PEG); гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GCSF); филграстим; модификация; масс-спектрометрия ESI-TOF.

Биоорг.химия 2012, 38 (5): 545-554