ПОЛУЧЕНИЕ АФФИННООЧИЩЕННЫХ ПРОТИВОПЕПТИДНЫХ АНТИТЕЛ К СУРВИВИНУ ДЛЯ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ БЕЛКА

© 2013 г. Е. В. Ахидова*^,***^,#, Т. Д. Волкова*, Д. О. Короев*, И. Ю. Якупов*, М. В. Калинцева*, Л. Э. Завалишина**, А. П. Каплун***, О. О. Жарская*, О. В. Зацепина*, О. М. Вольпина*

^#Тел.:+7 (495) 336-57-77; e-mail: [email protected]

*Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, 117997, Москва, ул.Миклухо-Маклая, 16/10;
**Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена, Москва;
***Московский государственный университет тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова, Москва

Поступила в редакцию: 21.09.2012г. Принята к печати: 26.10.2012 г.

Опухолеассоциированный белок сурвивин – это бифункциональный белок, который в зависимости от локализации в клетке и своего структурного состояния может участвовать либо в регуляции клеточного деления, либо в ингибировании апоптоза. Цель данной работы заключалась в получении моноспецифических антител к сурвивину, направленных к различным его участкам и пригодных для изучения структурно-функциональных особенностей белка. Изучена способность антител выявлять сурвивин в опухолевых клетках и тканях опухоли молочной железы. Показано, что наиболее высокой специфической активностью обладают антитела, направленные к участкам (1-22) и (95-105) белка. Антитела к участку (1-22) в условиях иммуноблота связываются преимущественно с сурвивинсодержащим комплексом, который, предположительно, является димером сурвивина, тогда как антитела к участку (95-105) выявляют только мономерную форму белка. Исследование образцов опухолей рака молочной железы показало, что мономер сурвивина присутствует только в образцах опухолевых тканей, тогда как сурвивинсодержащий комплекс экспрессируется как в опухолевых, так и в смежных с опухолью тканях. Показано, что в условиях иммуноцитохимии антитела к участку (1-22) выявляют преимущественно сурвивин ядерной локализации, участвующий в регуляции митоза, в то время как антитела к участку (95-105) дают окрашивание нуклеоплазмы и цитоплазмы на всех стадиях клеточного цикла. Таким образом, полученные антитела могут служить полезным инструментом для проведения структурно-функциональных исследований сурвивина.

Ключевые слова: сурвивин, синтетические пептиды, антитела, сурвивинсодержащий комплекс.

Биоорг.химия 2013, 39 (3): 326-337