УСИЛЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ХИМЕРНЫХ ГЕНОВ ВКЛЮЧЕНИЕМ В ИХ 3'-НЕТРАНСЛИРУЕМУЮ ОБЛАСТЬ ИНТРОНА 2 ГЕНА БЕТА-ГЛОБИНА ЧЕЛОВЕКА

^#Тел.: +7 (499) 724-81-22; e-mail: [email protected]

*ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 ГСП, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10
**ЗАО Евроген, 117997 ГСП, Москва, В437, ул. МиклухоМаклая, 16/10

Поступила в редакцию 04.10.2013 г. Принята к печати 25.11.2013 г.

Исследована возможность увеличения гетерологичной экспрессии в клетках млекопитающих при включении интронов в 3'-нетранслируемую область cоответствующего гена. Для этого в экспресси-онный вектор, содержащий ген флуоресцентного белка TagGFP2, вводили интрон 2 гена β-глобина человека. Данная последовательность встраивалась после стоп-кодона TagGFP2 на расстоянии 35 нт. от стоп-кодона до сайта сплайсинга. Это позволило избежать процесса нонсенс-опосредованной деградации мРНК. Использование второй рамки считывания, кодирующей красный флуоресцентный белок Katushka, позволило нормировать уровень трансфекции и экспрессии химерных конструкций. Проточная цитофлуориметрия культуры клеток HEK293T, временно трансфицированных генетическими конструкциями, содержащими и не содержащими интрон, позволила выявить увеличение интенсивности флуоресценции в зеленом канале для конструкции с интроном в 1.8 ± 0.2 раза относительно контрольной безинтронной конструкции. Аналогичное усиление уровня экспрессии в 1.7 ± 0.2 раза при наличии интрона 2 β-глобина 3'-нетранслируемой области было показано также для гена, кодирующего дестабилизированный вариант флуоресцентного белка TurboYFP. Эффект увеличения уровня экспрессии химерных конструкций в клетках млекопитающих введением интрона в 3'-нетранслируемую область целевого гена можно использовать в различных модельных системах, где введение 5'-концевого интрона в последовательность является неприемлeмым.

Ключевые слова: флуоресцентный белок, интрон, β-глобин человека, NMD, 3'-нетранслируемая область химерных генов, проточная цитофлуориметрия.

Биоорг. химия 2014, 40 (3): 293-296