ГИБРИДНЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ БЕЛКИ НА ОСНОВЕ 10-го ДОМЕНА ФИБРОНЕКТИНА ЧЕЛОВЕКА

© 2014 г. Л. Е. Петровская*^{, #}, С. Ш. Гапизов*^, **, Л. Н. Шингарова*, Е. А. Крюкова*, Е. Ф. Болдырева*, С. А. Якимов*, Е. В. Свирщевская*, Е. П. Лукашев**, Д. А. Долгих*^, **, М. П. Кирпичников*^, **

^#Тел./факс: +7 (495) 330-69-83; e-mail: [email protected]

*ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10
**Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Москва

Поступила в редакцию 25.11.2013 г. Принята к печати 24.12.2013 г.

В работе представлен новый тип гибридных молекул, включающих красный флуоресцентный белок mCherry и 10_й домен фибронектина человека типа III (10Fn3) – один из альтернативных каркасных белков, на основе которого могут быть получены рекомбинантные аналоги антител различной специфичности. Сконструированы различные варианты гена, кодирующего гибридный флуоресцентный белок, и изучена их экспрессия в клетках Escherichia coli. Установлено, что расположение mCherry на N-конце гибридного белка и предложенная нами модификация его N-концевой аминокислотной последовательности способствуют увеличению выхода продукта экспрессии в растворимой форме. На основе предложенной конструкции получен гибридный флуоресцентный белок ChIBF, содержащий αVβ3-интегринсвязывающий вариант 10Fn3, и продемонстрирована возможность его использования для визуализации αVβ3-интегрина на поверхности эпителиальных клеток MDCK методом конфокальной микроскопии.

Ключевые слова: 10-й домен фибронектина типа III, mCherry, интегрин αVβ3, конфокальная микроскопия.

Биоорг. химия 2014, 40 (4): 405-413