ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА СЕМЕЙСТВА 70 кДа В НЕЙТРОФИЛАХ ЧЕЛОВЕКА ПОД ДЕЙСТВИЕМ ТЕПЛОВОГО ШОКА

© 2014 г. А. А. Бойко*, С. С. Ветчинин**, А. М. Сапожников*, Е. И. Коваленко*^{, #}

^#Тел.: +7 (495) 330-40-11; e-mail: [email protected]

*ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 142279, Московская обл., Серпуховский р-н, пос. Оболенск

Поступила в редакцию 10.12.2013 г. Принята к печати 18.03.2014 г.

Изучены изменения в содержании конститутивного и индуцируемого белков семейства белков теплового шока 70 кДа (HSP70), вызванные тепловым шоком, в человеческих нейтрофилах – лейкоцитах с нетипично коротким периодом жизни, обеспечивающих в организме неспецифическую защиту от бактериальных патогенов. При анализе внутриклеточного содержания конститутивной и индуцируемой форм HSP70 методом проточной цитометрии в нейтрофилах была выявлена двухфазная динамика изменения уровня белка, характеризующаяся его увеличением непосредственно после теплового шока и последующим снижением этого уровня в течение 15–30 мин после завершения термического воздействия. Поскольку ингибитор белкового синтеза циклогексимид не приводил к изменению регистрируемого профиля динамики, сделано заключение, что увеличение уровня HSP70 не связано с синтезом этих белков de novo, но может быть обусловлено изменением конформации молекул HSP70 и увеличением доступности определенных эпитопов для связывания с антителами. С помощью панели антител, специфичных к N-концевому АТР-связывающему либо С-концевому субстратсвязывающему доменам белка, удалось показать, что ассоциированное с тепловым шоком возрастание внутриклеточного уровня HSP70, детектируемое с помощью методов клеточной иммунофлуоресценции и проточной цитометрии, обусловлено увеличением эффективности связывания антител, распознающих субстратсвязывающий домен. Также было продемонстрировано, что снижение внутриклеточного уровня HSP70, наблюдаемое после теплового шока, может быть частично обусловлено выбросом во внеклеточное пространство как конститутивной, так и индуцируемой форм белков HSP70, регулируемым с участием ABC-транспортеров.

Ключевые слова: нейтрофилы, клеточный стресс, белки теплового шока 70 кДа, Hsp70, Hsc70, тепловой шок.

Биоорг. химия 2014, 40 (5): 528-540