РОЛЬ СНИЖЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ ВНЕКЛЕТОЧНОГО КАЛЬЦИЯ В АКТИВАЦИИ Т-КЛЕТОК В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

© 2015 г. И. С. Литвинов^#, И. В. Мерсиянова

^#Тел.: +7 (495) 330-72-65, e-mail: [email protected]

ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ГСП-7, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 17.09.2014 г. Принята к печати 06.02.2015 г.

Кальций играет фундаментальную роль во многих жизненно важных функциях организма. Множество самых разнообразных инфекций способны приводить в той или иной мере к снижению концентрации ионов внеклеточного кальция ([Ca²⁺]_o) (гипокальциемии) в крови больных. Важность Ca²⁺ в процессах активации Т-лимфоцитов давно известна, но оптимальные интервалы значений [Ca²⁺]_o до сих пор не определены. Основной целью данной работы является изучение функциональной активности CD4⁺ Т-клеток в периферической крови человека (ПКЧ) in vitro в условиях гипокальциемии. В цельной крови здоровых доноров индукцию поликлональной активации проводили с помощью иммобилизированных моноклональных антител (мАт) к молекулам CD3 (epsilon цепь Т-клеточного рецептора) и растворенных мАт к CD28 (основная молекула костимуляции Т-клеток). Были исследованы зависимости параметров активации Т-клеток от величины [Ca²⁺]_o в ПКЧ in vitro. Продукция интерлейкинов IL-2, -4, -17А, IFN-γ и TNF-α, а также соответствующие доли CD4⁺CD69⁺, CD4⁺(ЦИТОКИН)⁺ и CD4⁺CD25⁺ Т-клеток были использованы в качестве параметров поликлональной активации Т-клеток в ПКЧ. Для снижения величины [Ca²⁺]_o в ПКЧ использовали EGTA. Согласно полученным данным, связывание ионов внеклеточного кальция с помощью EGTA приводит к нелинейным зависимостям параметров активации Т-клеток от величины [Ca²⁺]_o в ПКЧ. Добавление 10 мM EGTA к покоящимся клеткам не влияло на исследованные параметры активации. Зависимость параметров активации Т-клеток от величины [Ca²⁺]_o в ПКЧ представляет собой кривую с двумя максимумами и локальным минимумом между ними. Один из максимумов расположен в районе нижней границы нормы по [Ca²⁺]_o в ПКЧ, другой – смещен в область более низких значений [Ca²⁺]_o, характерных для патологических состояний. В тех же условиях активации в ПКЧ in vitro проанализирована продукция Т-клетками IL-2, -4, -17А, IFN-γ и TNF-α, а также соответствующих долей CD4⁺(ЦИТОКИН)⁺ и CD4⁺CD25⁺ Т-клеток. Все полученные зависимости близки по форме с зависимостью изменения доли активированных CD4⁺CD69⁺ Т-клеток в ПКЧ in vitro от значений [EGTA] и представляют собой кривые с двумя максимумами. Полученные закономерности описаны впервые. Скорее всего, наличие двух максимумов и локального минимума между ними для параметров зависимости активации Т-клеток в ПКЧ от величины [Ca²⁺]_o имеет важное физиологическое значение, так как гипокальциемия описана для многих патологий.

Ключевые слова: периферическая кровь человека, активация CD4⁺ Т-клеток, EGTA, концентрация внеклеточного кальция, цитокины, иммуноферментный анализ, проточная цитофлуориметрия.