КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ПЕПТИДА HLDF-6-АМИДА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ В ТКАНЯХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИХ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ И ДЕЙТЕРИЕМ ПРОИЗВОДНЫХ¹

© 2015 г. Ю. А. Золотарев*^{, #}, А. К. Дадаян*, Н. В. Кост**, М. Э. Воеводина**, О. Ю. Соколов**, В. С. Козик*, С. И. Шрам*, В. Н. Азев***, Э. В. Бочаров****, А. П. Богачук****, В. М. Липкин****, Н. Ф. Мясоедов*

^#Тел.: +7(499) 196-02-13; факс: +7(499) 196-02-21; e-mail: [email protected]

*ФГБУН Институт молекулярной генетики РАН, 123182, Москва, пл. Курчатова, 2;
**ФГБНУ Научный центр психического здоровья;

***ФГБУН Филиал Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН;
****ФГБУН Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Поступила в редакцию 31.03.2015 г. Принята к печати 10.06.2015 г.

На примере пептида HLDF-6-амид разработан новый метод фармакокинетики пептидных препаратов в тканях лабораторных животных, позволяющий практически полностью избежать их протеолитической деградации в ходе анализа. Гексапептид TGENHR – фрагмент 41–46 фактора дифференцировки лейкоцитов (HLDF), обладает широким спектром ноотропной и нейропротективной активности и на основе его амида TGENHR-NH₂ разрабатываются препараты для профилактики и лечения цереброваскулярных и нейродегенеративных заболеваний. Фармакокинетика и молекулярный механизм действия пептида TGENHR-NH₂ исследованы с использованием меченных тритием и дейтерием производных этого пептида. Меченые пептиды были получены с использованием реакции высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена (ВТКИО). Меченный тритием пептид [³H]TGENHR-NH₂ получен с молярной радиоактивностью 230 Ки/ммоль и меченный дейтерием пептид [²H]TGENHR-NH₂ – со средним включением дейтерия равным 10.5 атомов на молекулу пептида и равномерным ее распределением метки по молекуле пептида, доказанным методом ЯМР. Равномерность распределения метки в молекуле меченого пептида открывает возможность его использования для определения в тканях организма как его самого, так и всех его возможных фрагментов биодеградации. С использованием меченного тритием производного проведен количественный анализ основных метаболитов пептида TGENHR-NH₂, образующихся при его протеолетическом расщеплении в плазме крови, а также исследована фармакокинетика пептида TGENHR-NH₂ при внутривенном и интраназальном введениях мышам, крысам и кроликам. На основе полученных фармакокинетических профилей TGENHR-NH₂ в крови были рассчитаны значения основных фармакокинетических параметров, проверена гипотеза линейности и изучен метаболизм данного пептида. Показано, что пептид TGENHR-NH₂ обладает чрезвычайно высокой биодоступностью при интраназальном введении (34% для крыс) Пептид быстро выводится из крови, что связано с его активной протеолитической деградацией в тканях организма. Показано, что исследованный пептид TGENHR-NH₂ обладает высокой устойчивостью к протеолетическому гидролизу при инкубации с плазмой крови. Проведен количественный анализ образующихся при этом основных метаболитов.

Ключевые слова: HLDF-6 пептид, фармакокинетика, метаболизм, пептиды, меченные тритием и дейтерием, ¹Н-ЯМР, масс-спектрометрия.

__________________________

¹Статья публикуется по материалам сообщения, представленного на VII Российском симпозиуме “Белки и пептиды”; Новосибирск, 12–17 июля 2015 г.