ФУНКЦИОНАЛИЗИРОВАННЫЕ МЕТАЛЛОХЕЛАТЫ НА ОСНОВЕ ДИЭТИЛЕНТРИАМИНТЕТРАУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ ДЛЯ ХИМИЧЕСКОЙ МОДИФИКАЦИИ БЕЛКОВ И МАЛЫХ БИОМОЛЕКУЛ

© 2015 г. О. С. Куприенко^#, Л. В. Дубовская, П. С. Шабуня, С. А. Фатыхова, О. В. Свиридов

^#Тел.: +375 17 2637275; e-mail: [email protected]

Институт биоорганической химии НАН Беларуси, 220141, Минск, ул. Купревича, 5/2

Поступила в редакцию 05.02.2015 г. Принята к печати 01.07.2015 г.

Синтезированы бифункциональные реагенты на основе диэтилентриаминтетрауксусной кислоты, содержащие связанный ион Eu³⁺ и реакционноспособную группу для взаимодействия с белками и низкомолекулярными соединениями, для использования в лантанидном иммунофлуориметрическом анализе с применением диссоциативно-усиливающего раствора (ЛИФМА). Комплексонат Eu³⁺ и N¹-(2-аминоэтиламида) диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA) получен путем ацилирования N-Boc-1,2-этилендиамина диангидридом DTPA с последующими деблокированием аминогруппы и хелатированием ионов Eu³⁺. Металлохелат использован при синтезе конъюгатов с пероксидазой хрена и 3-(О-карбоксиметил)оксимом 17α-гидроксипрогестерона. В иммунохимической системе ЛИФМА показано, что конъюгат 3-(О-карбоксиметил)оксима 17α-гидроксипрогестрона с металлохелатом сохраняет сродство к соответствующим антителам. Ацилированием аминокомплексоната ди_N-сукцинимидным эфиром п-фталевой кислоты получен комплексонат Eu³⁺ и N¹-[2-(п-(сукцинимидилкарбокси)бензоиламино)этиламида] DTPA, который был использован при синтезе конъюгатов с человеческим сывороточным альбумином и иммуноглобулинами класса G. Количество связавшегося с модифицированным белком Eu³⁺ определяли по флуоресценции растворов конъюгатов в диссоциативно-усиливающем растворе. Показано, что полученные по предложенному методу конъюгаты моноклональных антител обеспечивают необходимые характеристики интенсивности флуоресценции, фона, чувствительности и специфичности для

ЛИФМА.

Ключевые слова: комплексонат европия, диэтилентриаминтетрауксусная кислота, лантанидный иммунофлуориметрический анализ.