ПОЛУЧЕНИЕ ТРАНСМЕМБРАННОГО ФРАГМЕНТА GHR-(254-298) РЕЦЕПТОРА ГОРМОНА РОСТА В БЕСКЛЕТОЧНОЙ СИСТЕМЕ ЭКСПРЕССИИ ДЛЯ СТРУКТУРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

© 2015 г. О. В. Бочарова*^{, #}, П. К. Кузьмичев*, А. C. Урбан*, С. А. Гончарук*, Э. В. Бочаров*, А. С. Арсеньев*

^#Тел.: +7 (495) 330-74-84; факс: +7 (495) 335-50-33; e-mail: [email protected]

*ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук, 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Поступила в редакцию 29.06.2015 г. Принята к печати 07.07.2015 г.

Гормон роста соматотропин и его мембранный рецептор GHR (growth hormone receptor), принадлежащий суперсемейству рецепторов типа I с тирозинкиназной активностью, участвуют в передаче многокаскадного межклеточного сигнала, регулирующего ряд важных физиологических и патологических процессов в организме человека. Связывание соматотропина инициирует переход рецептора GHR между двумя альтернативными димерными состояниями, что вызывает аллостерическую активацию тирозиновой протеинкиназы JAK2 (Janus kinase 2) в цитоплазме клетки. В сложный конформационный переход непосредственно задействован трансмембранный (ТМ) домен рецептора, имеющий предположительно два димеризационных интерфейса, соответствующих “ожидающему” и активному состоянию рецептора. Для изучения молекулярных основ прохождения биохимического сигнала через мембрану клетки мы разработали высокоэффективную систему бесклеточной продукции ТМ домена с функционально важными примембранными участками (фрагмент GHRtm, остатки 254-298). Метод позволяет получать от 1 мг на мл реакционной смеси ¹³C¹⁵N- и ¹⁵N-изотопно-^#меченого белка для структурно-динамических исследований димеризации ТМ домена рецептора GHR в мембраноподобных средах методом гетероядерной спектроскопии ЯМР высокого разрешения.

Ключевые слова: рецептор гормона роста, трансмембранный домен, рекомбинантный белок, бесклеточная система, ЯМР-спектроскопия.