ИДЕНТИФИКАЦИЯ НОВОГО МАКРОМОЛЕКУЛЯРНОГО КОМПЛЕКСА АКТИВАЦИИ КАСПАЗЫ-2 ПРИ ПОВРЕЖДЕНИЯХ ДНК¹

© 2016 г. Г. С. Копеина*^{, +}, А. В. Замараев*^{, +}, Б. Д. Животовский*^, **, И. Н. Лаврик*^, ***^{, #}

^#Тел.: +7 (495) 932-98-30, e-mail: [email protected]

*Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, 119192, Россия, Москва, Ломоносовский пр., д. 31, корп. 5;
**Институт медицины окружающей среды, Каролинский институт, 17177, Стокгольм, Швеция;
***Институт экспериментальной медицины, университет им. Отто фон Герике, 39120, Магдебург, Германия

Поступила в редакцию 10.05.2015 г. Принята к печати 15.08.2015

Каспаза-2 выполняет инициаторные функции при запуске апоптоза в ответ на повреждение ДНК в клетках. В работе изучен механизм активации инициаторной каспазы-2 в клетках линии карциномы яичника человека в ответ на их обработку ДНК-повреждающим химиотерапевтическим агентом цисплатином. Для идентификации макромолекулярного комплекса, в составе которого каспаза-2 активируется, разработан метод, основанный на комбинации гель-фильтрации и иммунопреципитации, первый этап которого позволяет отделить мономерную проформу белка от высокомолекулярного комплекса, а второй – выделить данный комплекс из высокомолекулярных фракций после проведения гель-фильтрации. Анализ полученного комплекса показал, что белок RAIDD, один из компонентов известной из литературы платформы активации каспазы-2 (PIDDosome), не взаимодействует с выделенной из высокомолекулярных фракций каспазой-2, и, следовательно, по всей вероятности, не входит в состав макромолекулярного комплекса активации фермента в исследуемой экспериментальной модели. Анализ ферментативной активности образцов иммунопреципитации подтвердил наличие активированной формы каспазы-2 в полученном высокомолекулярном комплексе.

Ключевые слова: апоптоз, каспаза-2, высокомолекулярный инициаторный комплекс, карцинома яичника.

_________________________

¹Статья публикуется по материалам сообщения, представленного на VII Российском симпозиуме "Белки и пептиды"; Новосибирск, 12-17 июля 2015 г.

⁺Данные авторы принимали равное участие в выполнении исследования.