ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА БИОТИНИЛИРОВАННОГО РЕКОМБИНАНТНОГО Fab-ФРАГМЕНТА АНТИТЕЛА К КОРТИЗОЛУ

© 2016 г. Д. О. Дормешкин^#, О. С. Куприенко, А. В. Свирид, А. А. Гилеп, О. В. Свиридов, С. А. Усанов¹

^#Тел.: +375 (025) 939-67-87; e-mail: [email protected]

Институт биоорганической химии НАНБ, 220141, Республика Беларусь, г. Минск, ул. акад. В.Ф. Купревича, 5, корп. 2

Поступила в редакцию 06.04.2015 г. Принята к печати 14.08.2015 г.

Описан метод получения рекомбинантных Fab-фрагментов антител, биотинилированных in vivo. Созданы оригинальные молекулярно-генетические конструкции для наработки фрагментов антител в бактериальной системе Escherichia coli. Получены биотинилированные in vivo Fab-фрагменты, специфично связывающие стероидный гормон кортизол. С помощью метода биослойной интерферометрии проанализирована кинетика взаимодействия этих фрагментов антител с кортизолом, конъюгированным с BSA. Показано, что равновесная константа диссоциации полученного комплекса K_D составляет 5.48 x 10^–10 М. Связывание является обратимым и конкурентно ингибируется свободным кортизолом. Полученные результаты могут быть использованы при разработке иммунохимических систем для количественного определения кортизола. Представленная система биотинилирования in vivo является универсальной и подходит для получения любых модифицированных биотином Fab-фрагментов антител в клетках E. coli.

Ключевые слова: рекомбинантные антитела, биотинилирование, биослойная интерферометрия, кортизол.

_________________________

¹Статья публикуется по материалам сообщения, представленного на VII Российском симпозиуме "Белки и пептиды"; Новосибирск, 12-17 июля 2015 г.

Биоорг. химия 2016, 42 (1): 28-35