РЕКОМБИНАНТНЫЕ ФОСФОРИБОЗИЛПИРОФОСФАТСИНТЕТАЗЫ ИЗ Thermus thermophilus HB27: ВЫДЕЛЕНИЕ И СВОЙСТВА

© 2016 г. Р. С. Есипов*^{, #}, Ю. А. Абрамчик*, И. В. Фатеев*, Т. И. Муравьева*, К. Г. Артемова*, И. Д. Константинова*, И. П. Куранова**^, ***, А. И. Мирошников*

^#Тел.: +7 (495) 336-68-33; факс: +7 (495) 330-74-10; эл. почта: [email protected]

*ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Российская Федеpация, Москва, ГСП-7, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**ФГБУН Институт кристаллографии им. А.В. Шубникова РАН;
***НИЦ “Курчатовский институт”

Поступила в редакцию 25.12.2015 г. Принята к печати 25.01.2016 г.

DOI: 10.7868/S0132342316040072

Осуществлено клонирование двух генов (TT_C1184 и ТТ_С1274) из Thermus thermophilus HB27, кодирующих белки с фосфорибозилпирофосфатсинтетазной активностью, в экспрессионный вектор pET23d+. Получены высокопродуктивные штаммы-продуценты Escherichia coli, продуцирующие оба белка в растворимой форме. Разработаны методики выделения термофильных фосфорибозилпирофосфатсинтетаз Tth PRPPS1 и Tth PRPPS2 и исследована зависимость активности ферментов от концентрации ионов металла, неорганического фосфата и температуры. Рассчитаны кинетические параметры для основных природных субстратов, а также исследована субстратная специфичность по отношению к различным 5-фосфатам углеводов D-ряда. Показано, что белки значительно различаются по данным характеристикам. На основании полученных результатов и сравнения Tth PRPPS1 и Tth PRPPS2 по аминокислотным последовательностям с другими бактериальными фосфорибозилпирофосфатсинтетазами оба фермента можно отнести к классу I PRPP-синтетаз.

Ключевые слова: фосфорибозилпирофосфатсинтетаза, рекомбинантная, термофилы, кинетика, субстратная специфичность

Биоорг. химия 2016, 42 (5): 567-577