БИОСПЕЦИФИЧНЫЕ НАНОЧАСТИЦЫ ДЛЯ МУЛЬТИПЛЕКСНОГО ФОСФОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА (ФОСФАН)

© 2016 г. Д. В. Парамонов*^{, #}, Т. С. Кострюкова*, Т. А. Быченкова**, В. Г. Помелова**, Н. С. Осин**

^#Тел: +7 (495) 490-41-11; эл. почта: [email protected]

*ФГУП “Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения”, 125424, Москва, Волоколамское шоссе 75/1
**ЗАО “ИММУНОСКРИН”, Москва

Поступила в редакцию 31.03.2016 г. Принята к печати 10.05.2016 г.

Разработана технология получения полимерных наночастиц, включающих фосфоресцентную метку – комплексы ионов европия с нафтоилтрифторацетоном и содержащих на поверхности ковалентно связанный стрептавидин. Наночастицы диаметром 40–60 нм агрегативно устойчивы, содержат до 2000 молекул метки на частицу, сохраняют биоспецифическую активность и стабильный уровень фосфоресценции на протяжении не менее 20 месяцев. Могут быть использованы в качестве эффективной детекторной системы для регистрации фосфоресценции с микрозон (микроэрреев), напечатанных на поверхности дна лунки стандартных полистирольных микропланшетов по технологии фосфоресцентного анализа (ФОСФАН^ТМ). Для создания плотного монослоя на поверхности микрозоны необходимо примерно 10⁸ частиц на микрозону, или 10⁹ частиц/мм² площади, что хорошо согласуется с теоретическими оценками. Порог детекции – 300–400 фосфоресцентных наночастиц на микрозону площадью ~0.1 мм². На модели определения тиреотропного гормона в высушенных на бумаге пятнах крови продемонстрировано 5-кратное повышение чувствительности по сравнению со стандартным вариантом метода ФОСФАН (с использованием фосфоресцентной метки-Pt-копропорфирина) и методом лантанидной иммунофлуоресценции (с регистрацией флуоресценции комплексов Eu³⁺ в специальном усиливающем растворе). Чувствительность детекторной системы на основе фосфоресцентных наночастиц составила 6.8 × 10⁵ молекул гормона в пробах объемом 1.5 мкл, что соответствовало его концентрации 1.5 × 10^–14 М.

Ключевые слова: наночастицы, фосфоресцентный анализ (ФОСФАН, PHOSPHAN), микрозоны (microarrays), люминесцентный анализ с временным разрешением (TR-FIA), комплексоны европия, Pt-копропорфирин, тиреотропный гормон (TSH).

Биоорг. химия 2016, 42 (6): 722-731