МОДИФИКАЦИЯ АЛЬБУМИНА С РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНЬЮ ОКИСЛЕНИЯ SH-ГРУПП ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С ГЛЮКОЗОЙ

© 2016 г. Н. Ю. Лотош*^{, #}, С. В. Савельев**, А. А. Селищева*

^#Тел.: +7 (916) 456-16-89, эл. почта: [email protected]

*Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, 119991, Россия, Москва, Ленинские горы, 1
**Институт морфологии человека РАМН, 117418, Москва, ул. Цюрупы, 3

Поступила в редакцию 08.02.2016 г. Принята к печати 30.03.2016 г.

Молекула основного белка крови альбумина содержит 34 остатка цистеина, включенные в дисульфидные связи, и одну неспаренную SH-группу остатка Cys34. В норме 20–30% этих SH-групп окислены и образуют дисульфидные связи или остатки сульфеновой, сульфиновой и сульфоновой кислот. Целью данной работы явилось изучение влияния степени окисления сульфгидрильных групп на способность альбумина к гликированию. В работе использовали коммерческий альбумин человека, содержащий 0.4 моль сульфгидрильных групп на 1 моль белка (немеркаптоальбумин). В этом препарате дисульфидные связи восстанавливали до 0.7 моль/моль с помощью дитиотреитола, получая таким образом меркаптоальбумин. Препараты инкубировали в растворе глюкозы с концентрацией 5 и 50 мМ в течение трех недель. Содержание продукта гликирования – кетоамина – определяли колориметрическим методом, наличие пентозидина (конечного продукта гликирования) анализировали методом флуоресценции, содержание SH-групп определяли с помощью реактива Эллмана. Изменение структуры и свойств белка при гликировании изучали методами флуоресценции и ВЭЖХ. При инкубации обоих препаратов альбумина с 5 мМ глюкозой не наблюдали существенного увеличения содержания кетоамина, в то время как инкубация с 50 мМ глюкозой сопровождалась его значительным накоплением. Установили, что в этих условиях наибольшее количество кетоамина образуется в немеркаптоальбумине, при этом интенсивность флуоресценции триптофана уменьшается. Интенсивность флуоресценции пентозидина возрастает с увеличением содержания кетоамина. Совокупность полученных результатов позволяет сделать вывод о том, что окисление свободных SH-групп белка изменяет его конформацию, в результате чего становится возможным гликирование ранее скрытых сайтов, и степень гликирования белка повышается.

Ключевые слова: кетоамин, пентозидин, меркаптоальбумин, немеркаптоальбумин, человеческий сывороточный альбумин.

Биоорг. химия 2016, 42 (6): 689-696