ФЛУОРЕСЦЕНТНОЕ МЕЧЕНИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ЗОНДОВ TaqMan С ПОМОЩЬЮ “КЛИК”-ХИМИИ ПО РЕАКЦИИ КАТАЛИЗИРУЕМОГО Cu(I) АЗИД-АЛКИНОВОГО ЦИКЛОПРИСОЕДИНЕНИЯ (CuAAC)¹

© 2017 г. С. В. Васильева*^{, #}, Е. А. Буракова*, Л. Г. Жданова**^, ***, М. С. Анисименко**^, ***, Д. А. Стеценко*

^#Тел.: +7 (383) 363-51-83; факс: +7 (383) 363-51-82; эл. почта: [email protected]

*ФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения РАН, 630090, Новосибирск, просп. Академика Лаврентьева, 8
**ООО “БиоЛинк”, 630060, Новосибирск, ул. Тимакова, 2/12
***ФГБНУ НИИ молекулярной биологии и биофизики, 630060, Новосибирск, ул. Тимакова, 2/12

Поступила в редакцию 16.07.2016 г. Принята к печати 08.08.2016 г.

Предложен метод получения олигонуклеотидных зондов TaqMan, основанный на постсинтетическом “клик”-мечении азидопроизводным флуоресцеина алкинильной боковой цепи остатков пиримидинов по реакции катализируемого Cu(I) диполярного [3 + 2]-циклоприсоединения азидов и алкинов (CuAAC). Олигонуклеотиды, содержащие алкинильную группу, были синтезированы с использованием разработанных авторами ранее дезоксиуридинового или дезоксицитидинового фосфитамидных мономеров. Были получены олигонуклеотидные зонды TaqMan, содержащие на 3'-конце гаситель флуоресценции и в различных внутренних положениях остаток флуоресцеина. Показано, что данные зонды позволяют детектировать накопление продукта в ходе ПЦР в режиме реального времени. Отмечено, что при сближении флуоресцентной метки с 3'-концом, несущим гаситель, эффективность гашения флуоресценции возрастает (уровень фоновой флуоресценции падает).

Ключевые слова: ПЦР в реальном времени, флуоресцентный зонд, фосфитамид.

_________________

¹Статья публикуется по материалам сообщения, представленного на конференции “Химическая биология-2016”; г. Новосибирск, 24–29 июля 2016 г.

Биоорг. химия 2017, 43 (1): 51-58