ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ГРАДИЕНТА САЙТОВ СВЯЗЫВАНИЯ МОРФОГЕНОВ В ЭМБРИОНЕ ШПОРЦЕВОЙ ЛЯГУШКИ С ПОМОЩЬЮ ФЛУОРЕСЦЕНТНО МЕЧЕННОГО ГЕПАРИН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО МОТИВА МОРФОГЕНА BMP4

^#Тел.: +7 (915) 204-04-80; факс: +7 (495) 336-36-22; эл. почта: [email protected]

*ФГБУ науки Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Россия, 117997 ГСП, Москва, В:437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**НИИ физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского МГУ, Россия, 119992, Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 40

Поступила в редакцию 23.11.2016 г. Принята к печати 28.11.2016 г.

DOI: 10.7868/S0132342317030149

На модели эмбрионов шпорцевой лягушки Xenopus laevis продемонстрировано пространственное распределение гепарансульфатов внеклеточного матрикса эмбриона на стадии средней гаструлы. Для этого в экспрессионной системе E. coli была синтезирована флуоресцентная белковая конструкция EGFP-hbmBMP4, состоящая из зеленого флуоресцентного белка (EGFP) и гепарин-связывающего домена белка BMP4 (Bone Morphogenetic Protein 4). Эмбрионы шпорцевой лягушки фиксировали на стадии средней гаструлы (11 стадия), разрезали вдоль передне-задней оси и инкубировали с EGFP-hbmBMP4. Полученные флуоресцентно окрашенные препараты анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа. Полученные данные о пространственном распределении интенсивности адсорбции BMP4 во внеклеточном матриксе эмбриона оказались сходными с полученным нами ранее аналогичным распределением для сайта связывания морфогена Noggin1. Наибольшая интенсивность наблюдалась в области организатора, а также, несколько меньшая, в области вентральной губы бластопора. Поскольку сайты связывания гепарина у белков BMP4 и Noggin1 существенно различаются, а пространственные распределения их адсорбции в эмбрионе сходны, полученные данные указывают на универсальность адсорбционного градиента во внеклеточном пространстве зародыша для всех секретируемых морфогенов, имеющих сайт связывания гепарина.

Ключевые слова: BMP4, Noggin1, внеклеточный матрикс.

Биоорг. химия 2017, 43 (3): 333-336