ХИМЕРНЫЕ Fab-ФРАГМЕНТЫ АНТИТЕЛ К РЕКОМБИНАНТНОМУ ГЛИКОПРОТЕИНУ ВИРУСА ЭБОЛА

© 2017 г. А. А. Панина*^{, #}, И. Г. Дементьева***, Т. К. Алиев**, В. А. Топорова*, М. Н. Боков***, Л. П. Позднякова***, О. Б. Шемчукова***, Д. А. Долгих*, П. Г. Свешников***, М. П. Кирпичников****

^#Тел.: +7 (916) 292-76-51; +7 (495) 330-66-38; эл.почта: [email protected]; [email protected]

*Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10;
**Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва;
***Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва;
****Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, Москва

Поступила в редакцию 06.10.2016 г. Принята к печати 17.11.2016 г.

DOI: 10.7868/S0132342317040078

Ранее нами были установлены нуклеотидные и аминокислотные последовательности вариабельных доменов трех мышиных моноклональных антител, специфичных к индивидуальным эпитопам гликопротеина вируса Эбола: GPE118 (IgG), GPE325 (IgM) и GPE534 (IgG) [1]. В настоящей работе на основе вариабельных доменов мышиных антител путем присоединения к ним константных участков CH1 и CL каппа-IgG1 человека получены химерные Fab-фрагменты антител Fab118, Fab325, Fab534. Проведена наработка рекомбинантных химерных Fab-фрагментов в системе гетерологической экспрессии Escherichia coli, а также их выделение и очистка с использованием аффинной металл-хелатной хроматографии. Изучены иммунохимические свойства полученных Fab-фрагментов методами иммуноблоттинга, а также непрямого и конкурентного ИФА с использованием рекомбинантных белков вируса Эбола – EBOV rGPdTM (рекомбинантный гликопротеин вируса геморрагической лихорадки Эбола без трансмембранного домена), NP (нуклеопротеин) и VP40 (структурный белок). Доказана подлинность рекомбинантных химерных Fab-фрагментов, а также их специфичность по отношению к рекомбинантному гликопротеину вируса геморрагической лихорадки Эбола (EBOV GP). Результаты непрямого ИФА свидетельствуют об отсутствии перекрестного иммунологического взаимодействия с белками NP и VP40 вируса Эбола. Определены константы диссоциации комплекса антиген-антитело К_d для Fab 118, Fab 325 и Fab 534, равные соответственно 5.0, 1.0 и 1.0 нМ и указывающие на высокое сродство полученных экспериментальных образцов к EBOV GP. Исследована эпитопная специфичность Fab-фрагментов с использованием панели коммерческих нейтрализующих антител. Установлено, что все исследуемые антитела против EBOV GP направлены против разных эпитопов, при этом эпитопы рекомбинантных химерных Fab-фрагментов и исходных мышиных моноклональных антител (мАТ) совпадают. Все полученные и исследованные нами мАТ против EBOV GP специфичны к эпитопам, совпадающим или перекрывающимся с эпитопами трех коммерческих нейтрализующих мАТ против вируса Эбола: эпитопы Fab 118 и Fab 325 перекрываются с эпитопом известного коммерческого мАТ h13F6, эпитоп Fab 325 перекрывается также с эпитопом мАТ c6D8; эпитоп Fab 534 расположен вблизи конформационного эпитопа мАТ KZ52, в образовании которого принимают участие аминокислотные остатки из доменов GP1 и GP2 EBOV GP.

Ключевые слова: вирус геморрагической лихорадки Эбола, терапевтические моноклональные антитела, Fab-фрагмент.

Биоорг. химия 2017, 43 (4): 389-401