ВЫЯВЛЕНИЕ МУТАЦИЙ ОНКОГЕНОВ У БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОЧИПОВОЙ ПЦР

^#Тел.: +7 (911) 289-26-88; e-mail: [email protected]

*НИИ Гематологии, Федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова, 197341, Санкт-Петербург, ул. Аккуратова, 2;
**Группа компаний “Люмэкс”, Санкт-Петербург

Поступила в редакцию 02.09.2016 г. Принята к печати 13.09.2016 г.

В настоящее время цитогенетические и молекулярно-биологические методы исследований, предназначенные для выявления хромосомных перестроек, сопровождающихся мутационными изменениями онкогенов, широко применяются в диагностике лейкозов. Благодаря высокой точности, специфичности и чувствительности молекулярно-биологических тестов, основанных на ПЦР, их диагностическое преимущество перед цитогенетическим анализом не вызывает сомнения. Выполнение классической ПЦР в пробирке, содержащей 25 мкл анализируемой пробы, подходит для качественной и количественной оценки онкогенных мутаций онкогенов. Однако такое тестирование требует использования больших количеств кДНК и реактивов ПЦР и занимает продолжительное время. Поэтому в настоящем исследовании была проведена модификация и оптимизация условий амплификации с использованием микрочипов и отечественных реактивов для одновременного анализа 15 онкогенных мутаций, наиболее часто встречаемых при лейкозах. Показано, что при снижении количеств кДНК и реактивов ПЦР, в том числе Taq-полимеразы, в 10 раз, а также уменьшении общей продолжительности анализа, включая качественную и количественную оценку транскриптов, в 2 раза, метод выявления указанных мутаций с помощью микрочиповой ПЦР полностью сохраняет свою эффективность и позволяет определять минимальное количество копий (n ≥ 5) гена-мишени в пробе. Это делает актуальным применение микрочиповой ПЦР не только для первичной диагностики лейкоза, но и для мониторинга минимальной остаточной болезни (МОБ).

Ключевые слова: ПЦР, микрочип, онкогены, лейкоз.

Биоорг. химия 2017, 43 (5): 523-531