EXPLORING TRANSGENE TRANSFER FROM THE TRANSGENIC CHICKEN MODEL TO ITS OFFSPRING THROUGH A NONVIRAL VECTOR¹

^#E-mail: [email protected], [email protected]

*College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang, 471003 China;
**College of Life Science, Luoyang Normal University, Luoyang, 471002 China;
***College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang, 453003 China;
****Henan University of Science and Technology Affiliated First Hospital, Luoyang, 471003 China;
*****Centre of Inflammation and Cancer Research, 150th Central Hospital of PLA, Luoyang, 471031 China

Поступила в редакцию 11.01.2017 г. Принята к печати 04.04.2017 г.

Исследование переноса трансгена потомству трансгенных кур, полученных с помощью невирусного вектора. Использование кур в качестве биореакторов для производства больших количеств биофармацевтических препаратов представляет немалый интерес. Однако известно, что неустойчивая экспрессия чужеродных генов, особенно при использовании невирусных векторов, приводит к низкой эффективности получения трансгенного потомства. В настоящей работе куриная трансгенная модель была исследована с целью определить, может ли чужеродный ген стабильно экспрессироваться

и передаваться потомству посредством невирусного вектора, содержащего MAR-последовательности (от англ. matrix attachment regions – области связывания с ядерным матриксом) и eGFP в качестве репортерного гена. Новым эукариотическим экспрессионным вектором pEGFP-N1-MAR трансфицировали куриную бластодерму на стадии X для получения поколения G0 трансгенных кур. Исследовали различные места введения вектора; 18 из 40 яиц, которым вводили плазмиду pEGFP-N1-MAR в темное поле, вылупились после 21 дня инкубации; вылупляемость составила 45%. Напротив, яйца, которым плазмиду вводили в светлое поле, не вылупились. Данные флуоресцентной детекции и ПЦР подтвердили, что 4 вылупившихся цыпленка поколения G0 экспрессировали ген eGFP. Более того, флуоресцентная детекция показала, что 2 из 65 цыплят поколения G1 экспрессировали ген eGFP. Таким образом, наличие последовательностей MAR в векторе способствует получению трансгенных кур; применение плазмиды pEGFP-N1-MAR является новым подходом к получению потомства трансгенных кур.

Ключевые слова: трансгенные куры, биореакторы, MAR, невирусные векторы, темное поле, светлое поле.

____________________________

¹Полный текст статьи печатается в английской версии журнала.

Биоорг. химия 2017, 43 (5): 553