ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВНУТРИ- И ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ФОРМ ЛИТИЧЕСКИХ ЭНДОПЕПТИДАЗ AlpA и AlpB LYSOBACTER SP. XL1

© 2017 г. Н. В. Руденко*^, **^{, #}, А. П. Каратовская*^, **, И. М. Цфасман***, Ф. А. Бровко*^, **, Н. В. Васильева***

^#Тел.: +7 (926) 592-11-89; эл. почта: [email protected]

*Филиал ФГБУН Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290, Московская обл., г. Пущино, пр. Науки, 6;
**Пущинский государственный естественно-научный институт, 142290, Московская обл., г. Пущино, пр. Науки, 3;
***ФГБУН Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, 142290, Московская обл., г. Пущино, пр. Науки, 5

Поступила в редакцию 07.12.2016 г. Принята к печати 24.03.2017 г.

Гомологичные эндопептидазы AlpA и AlpB – компоненты секретируемого комплекса литических ферментов грамотрицательной бактерии Lysobacter sp. ХL1. Эти ферменты синтезируются в виде предшественников, состоящих из сигнального пептида, пропептида и протеолитически активной зрелой части. Для понимания особенностей топогенеза этих белков клеточные фракции бактерии были исследованы чувствительным сэндвич-иммуноферментным анализом и иммуноблоттингом с использованием моноклональных антител, узнающих уникальные эпитопы зрелых форм белков и их пропептидов. Показано, что за пределы клетки в окружающую среду попадают только зрелые формы ферментов. По уровню продукции на ранней стационарной стадии роста AlpA значительно превосходит AlpB. Предшественник AlpB выявлен в цитоплазматической и периплазматической фракциях, а предшественник AlpA – только в цитоплазматической фракции. В периплазматической фракции обнаружены также зрелые формы обоих ферментов и их пропептиды. Полученные результаты свидетельствуют о том, что экспорт белков AlpA и AlpB в окружающую среду происходит по разным механизмам: AlpA транслоцируется через клеточную оболочку, не задерживаясь в периплазме. Гомологичный ему фермент AlpB, напротив, накапливается в периплазматическом пространстве и захватывается внешнемембранными везикулами в процессе их образования.

Ключевые слова: Lysobacter, эндопептидазы, белки, секреция, моноклональные антитела, сэндвич-иммуноферментный анализ.

Биоорг. химия 2017, 43 (5): 501-506