ОЧИСТКА И КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ КОМПЛЕКСОВ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АФФИННОГО МОНОСЛОЯ¹

^#Тел.: +7(495)938-00-05; эл. почта: [email protected]

*Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119234, Россия, Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12;
**Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва;
***Fox Chase Cancer Center, 19111, Philadelphia, PA, USA

Поступила в редакцию 21.06.2017 г. Принята к печати 03.07.2017 г.

DOI: 10.7868/S0132342317060069

Знание структур интермедиатов транскрипции хроматина способно пролить свет на функционирование РНК-полимеразы в клетке, что имеет важное значение как для фундаментальной науки, так и для разработки терапевтических подходов при лечении заболеваний, связанных с нарушением транскрипции. В данном исследовании использованы аффинные монослои, сформированные липидами, связанными с ионами Ni, для концентрирования РНК-полимеразы из разбавленного раствора, содержащего глицерин. Была показана принципиальная возможность выделения и концентрирования РНК-полимеразы с помощью Ni-липидного монослоя из раствора, содержащего криопротектор глицерин, который в обычных условиях затрудняет визуализацию при электронной микроскопии. Такой метод выделения позволяет получить более разнообразные пространственные ориентации молекул на подложке, что облегчает трехмерную реконструкцию по данным электронной микроскопии. Полученные результаты могут использоваться для дальнейшего изучения структурных основ процесса транскрипции и идентификации взаимодействий в транскрипционных комплексах, содержащих РНК-полимеразу.

Ключевые слова: электронная микроскопия, обработка изображений, РНК-полимераза, Ni-липиды, монослой липидов

Биоорг. химия 2017, 43 (6): 637-643

__________________

¹Статья публикуется по материалам сообщения, представленного на VIII Российском симпозиуме “Белки и пептиды”, 18–22 сентября 2017 г., г. Москва