ВЛИЯНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО РАСЩЕПЛЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА G ПЛАЗМИНОМ НА СВЯЗЫВАНИЕ И АКТИВАЦИЮ ПЛАЗМИНОГЕНА

© 2018 г. P. Б. Айсина^1,*, Л. И. Мухаметова^1,2, К. Б. Гершкович³, В. Н. Яковлев⁴, Е. И. Гоуфман⁵, Н. Б. Тихонова⁵

*Тел.: +7 (495) 939-50-83; +7 (985) 981-34-07; эл. почта: [email protected]

¹ФГБОУ Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Химический факультет, 119992 Москва, Ленинские горы, 1/3;
²ФГБОУ Московский государственный технический университет им. Н.Э. Баумана, Москва;
³ФГБУН Институт биохимической физики им. Н.М. Эммануэля РАН, Москва;
⁴ООО “Ангиоген”, Москва;
⁵ФГБНУ НИИМЧ, Москва

Принята к печати 31.08.2017 г. Поступила в редакцию 11.07.2017 г.

DOI: 10.7868/S0132342318020112

Разработан метод ИФА для измерения степени связывания различных образцов иммуноглобулина (IgG) и его фрагментов c плазминогеном человека. В этом методе в качестве детектора, вместо плазминогена, была использована иммобилизованная на поверхности планшеты тяжелая цепь плазминогена (Pg-H), содержащая пять лиганд-связывающих крингл-доменов. С помощью этого метода выявлено, что обработанный плазмином IgG (IgG_Pm-t) связывается с иммобилизованной Pg-H в 2.84 раза сильнее, чем интактный IgG. В данном исследовании оба образца IgG демонстрируют слабое неспецифическое связывание с иммобилизованной легкой цепью плазминогена (Pg-L). Показано, что 0.2 М L-лизин ингибирует связывание IgG_Pm-t и не влияет на не специфическое связывание интактного IgG с иммобилизованной Pg-H, что указывает на участие лизинсвязывающих участков Pg-H в связывании с IgG_Pm-t. Предварительная обработка исследуемых образцов IgG карбоксипептидазой В (CPB) ингибировала связывание IgG_Pm-t и не влияла на не специфическое связывание интактного IgG с иммобилизованной Pg-H, что указывает на ключевую роль С-терминального лизина IgG_Pm-t в специфическом связывании с лизинсвязывающими центрами плазминогена. Изучение влияния интактного IgG и IgG_Pm-t на скорость активации Glu- и Lys-форм плазминогена (Glu-Pg и Lys-Pg) тканевым активатором плазминогена (tPA) и урокиназой (uPA) в буфере показало, что интактный IgG полностью подавлял активацию обоих форм плазминогена как tPA, так и uPA. Наблюдаемый ингибирующий эффект интактного IgG, возможно, вызван стерическими затруднениями, которые он создает для белок-белковых взаимодействий активаторов с зимогеном. IgG_Pm-t ускорял генерацию плазмина из плазминогена. При этом стимулирующий эффект IgG_Pm-t на активацию Glu-Pg с tPA был на ~25% выше, чем на активацию Lys-Pg, что объясняется более значительными конформационными изменениями в молекуле Glu-Pg, по сравнению с молекулой Lys-Pg, после их связывания с IgG_Pm-t. Полученные в данной работе результаты предполагают, что специфическое расщепление IgG плазмином может быть одним из механизмов вовлечения системы плазминоген/плазмин в различные физиологические и патологические процессы.

Ключевые слова: плазминоген, активаторы плазминогена, плазмин, иммуноглобулин G, связывание, активация.

Биоорг. химия 2018, 44 (2): 194-202