МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К РЕКОМБИНАНТНОМУ БЕЛКУ VP7 ВИРУСА БЛЮТАНГА

© 2019 г. Н. В. Руденко*^, **^{, #}, А. П. Каратовская*, А. О. Шепеляковская*, А. В. Замятина*^, **, Ф. А. Бровко*^, **, А. Ю. Кольцов***, И. Р. Иматдинов***, А. Р. Иматдинов***, О. М. Стрижакова***, К. А. Мима***, В. М. Лыска***, Д. В. Колбасов***

^#Тел.: +7 (926) 592-11-89; эл. почта: [email protected]

*Филиал Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Россия, 142290, Пущино, проспект Науки, 6;
**Пущинский государственный естественно-научный институт, Россия, 142290, г. Пущино, проспект Науки, 3;
***Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии”, Россия, 601125, Владимирская обл., пос. Вольгинский, ул. Академика Бакулова, стр. 1

Поступила в редакцию 11.04.2019 г. После доработки 11.06.2019 г. Принята к публикации 11.07.2019 г.

DOI: 10.1134/S013234231906037X

Блютанг, или катаральная лихорадка овец, – вирусная трансмиссивная инфекция жвачных, которая является одной из экономически значимых арбовирусных инфекций животных и передается кровососущими насекомыми рода Culicoides. Вирусный белок VP7 является группоспецифическим коровым белком вируса, консервативным для всех его известных серотипов, поэтому представляет собой наиболее подходящую мишень для создания диагностических тестов. Для разработки иммунохимического метода обнаружения вирусной инфекции получена панель моноклональных высокоаффинных антител к VP7. В качестве иммуногенов использовали экспрессированный в E. coli N-концевой фрагмент VP7 и инактивированные вирусные частицы. Полученные моноклональные антитела применимы для выявления вируса в зараженных клетках. В качестве видоспецифического антигена создан рекомбинантный белок TrxA-VP7_а, который содержит пространственные эпитопы, подобные таковым в составе нативного вирусного антигена. С его помощью отобраны перспективные антитела для проведения диагностики заболевания конкурентным иммуноферментным анализом, позволяющим выявлять специфические антитела к вирусу блютанга в сыворотках инфицированных животных. Методом конкурентного твердофазного ИФА показано, что наиболее эффективно взаимодействующие с белком TrxA-VP7_а антитела (Bt14, Bt15, Bt18, Bt26, Bt33, Bt34 и Bt35) узнают близкие или перекрывающиеся эпитопы VP7. Взаимодействие с антигеном практически всех полученных антител ингибировалось референтными специфическими сыворотками против вируса блютанга 24-х серотипов. Моноклональное антитело Bt14 демонстрировало максимальную способность блокировать взаимодействие VP7 со специфическими сыворотками против 24-х серотипов вируса блютанга. Таким образом, полученная панель моноклональных антител к VP7 вируса блютанга может быть использована для обнаружения вирусной инфекции, а также в качестве компонента наборов для серологической диагностики болезни.

Ключевые слова: вирус блютанга (BTV), вирусный белок 7 (VP7), моноклональные антитела, эпитопы

Биоорг. химия 2019, 45 (6): 615-623