ОДНОВРЕМЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИРЕОТРОПНОГО ГОРМОНА И СВОБОДНОГО ТИРОКСИНА В СУХИХ ПЯТНАХ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФОСФОРЕСЦЕНТНЫХ НАНОЧАСТИЦ

© 2020 г. Н. И. Бекман*^{, #}, С. Ю. Ларичева*, Т. А. Быченкова**, В. Г. Помелова*, Н. С. Осин**

^#Тел.: +7(903)180-52-85, эл. почта: [email protected]

*ФГУП “Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения”, Россия, 125424, Москва, Волоколамское шоссе, 75/1;
**ЗАО “ИММУНОСКРИН”, Россия, 125424, Москва, Волоколамское шоссе, 75/1

Поступила в редакцию 21.06.2019 г. После доработки 27.08.2019 г. Принята к публикации 24.09.2019 г.

DOI: 10.31857/S0132342320020074

На основе технологии фосфоресцентного анализа (ФОСФАН) разработана экспериментальная тестовая система для одновременного определения маркеров состояния функции щитовидной железы – свободного тироксина (fT₄) и тиреотропного гормона (TSH) – в высушенных образцах крови человека. Иммуноанализ гормонов проводили с использованием специфических микроэрреев (диаметр 0.35 мм), напечатанных на дне лунок полистиролового 96-луночного микропланшета, и системы детекции на основе полистироловых наночастиц (диаметр 46±14 нм), содержащих инкорпорированную длительно люминесцирующую фосфоресцентную метку (1960 молекул на частицу) на основе хелатных комплексов Eu(III). Интенсивность флуоресценции измеряли в режиме временного разрешения. Исследованы значения аналитических параметров и возможные ограничения разработанной системы. Система обеспечивала одновременное обнаружение высокомолекулярных и низкомолекулярных соединений в клинически значимых диапазонах концентраций – от 2.0 до 50 пмоль/л для fT₄ и от 0.8 до 50 мкМЕ/мл для TSH. Чувствительность анализа составила 1.0±0.2 пмоль/л (fT₄) и 0.3±0.1 мкМЕ/мл (TSH), что соответствовало порогам обнаружения 3×10^–18 моль Т4 и 0.9×10^–9 МЕ TSH. Тест правильно определил концентрации TSH и Т4 в стандартных образцах, используемых в программах оценки качества, а также тиреоидный статус исследованных пациентов (n=48). Результаты определения гормонов в высушенных пятнах крови с помощью экспериментальной тестовой системы хорошо коррелировали с результатами определения гормонов в образцах сыворотки с использованием коммерческих наборов (r=0.9730 для TSH и r=0.8585 для свободного Т4). Основной недостаток системы состоит в высокой вариабельности результатов измерений (до 20%), что ограничивает возможность ее использования для количественного определения уровня гормонов в крови пациента. Мы считаем, что эта система может быть полезна для выявления нарушений функции щитовидной железы в рамках существующих программ неонатального скрининга на врожденный гипотиреоз, а также при массовых скрининговых обследованиях групп риска взрослого населения, в частности в экологически неблагоприятных регионах.

Ключевые слова: наночастицы, фосфоресцентный анализ (ФОСФАН, PHOSPHAN), микрозоны (microarrays), тиреотропный гормон (TSH), свободный тироксин (fT₄), сухие пятна крови (DBS)

Биоорг. химия 2020, 46 (2): 170-179